تلطيخ كينيون: الأساس والتقنيات

تلطيخ Kinyoun هو تقنية تلطيخ تستخدم في تلطيخ البكتيريا والطفيليات المقاومة للحمض. ولدت من تعديل تلوين زيل نيلسن. يتم تفسير كلتا التقنيتين بالطريقة نفسها ولكنها تختلف في عنصرين: في إعداد الكاشف الرئيسي وفي أن تقنية Kinyoun لا تستخدم الحرارة.

لهذا السبب ، يُعرف أيضًا باسم تلطيخ بارد Ziehl-Nelsen أو Kinyoun. يشار إلى تلوين المتفطرة السلية ، الميكوباكتريوم الجذام ، الميكوباكتريا غير التقليدية ، نكوكاردياس س ، الكريبتوسبوريديوم بارفوم ، الكريبتوسبوريديوم ميليجريديس ، الكريبتوسبوريديوم فيليس ، الكريبتوسبوريديوم موريس ، السيكلوسبوريس .

تجدر الإشارة إلى أن Nocardias وصمة عار ضعيفة مع هذه التقنية لأنها الكحول جزئيا مقاومة للحمض ، لذلك لهذا النوع هناك تعديل للمنهجية.

في المقابل ، تم دمج تقنية Kinyoun الباردة مع تقنية ثلاثي الألوان المعدلة بواسطة Didier للكشف عن الكوكسيديا ( Criptosporidium parvum و Isospora belli ) وجراثيم microsporidia ( Enterocytozoon bieneusi و Encephalitozoon intestinalis ).

مؤسسة

الكاشف الرئيسي للتلوين هو كاربوك فوشين أو فوتشين فاكسين ، الذي له خاصية الارتباط بالأحماض الكربولية داخل جدار الخلية الشمعي ، غني بالدهون (الأحماض الفطرية) من الفطريات وبعض الطفيليات.

هذا الاتحاد لا يتصدى لإزالة الأحماض. لذلك ، يتم تعريف الكائنات الحية الدقيقة كالكحول المقاوم للحمض.

على عكس تقنية Ziehl-Neelsen - التي تحدد الصبغة خلال الحرارة - في تقنية Kinyoun ، هذه الخطوة ليست ضرورية ، لأن محلول fuchsin الفينولي المحضر لهذه التقنية يحتوي على تركيز عالي من الفينول.

يذوب الفينول المادة الدهنية الموجودة في جدار الخلية ، والتي تسمح بدخول صبغة الكاربو فوشين. بعد اختراق الصبغة ، تظل ثابتة على الرغم من غسلها بحمض الكحول.

وبهذه الطريقة ، تتخذ الكائنات الحية الدقيقة المقاومة للحمض لونًا أحمر مميزًا ، في حين أن كل شيء ليس كحولًا مقاومًا للحمض يصبح مشوهًا وملونًا باللون الأزرق.

تقنية

المواد

- تعديل fuchsin الفينولية.

- حمض الكحول.

- الميثيلين الأزرق.

تحضير كينيون فوشين محفور

- fuchsin الأساسية: 4 غرام.

- الفينول: 8 مل.

- الكحول (95 ٪): 20 مل.

- الماء المقطر: 100 مل.

يجب أن يذوب الفوشين الأساسي في الكحول ببطء ، ويمزج باستمرار. بعد ذلك ، يتم إذابة الفينول المتبلور في حمام مائي عند 56 درجة مئوية. مرة واحدة يذوب ، تضاف 8 مل إلى حل fuchsin أعدت أعلاه.

إعداد حمض الكحول

- حمض الهيدروكلوريك المركز: 3 مل.

- الإيثانول (95 ٪): 97 مل.

يجب أن يقاس ، انضم ومختلط.

إعداد الميثيلين صبغة التباين الأزرق

- الميثيلين الأزرق: 0.3 غرام.

- الماء المقطر: 100 مل.

يزن ويذوب.

Kinyoun تقنية وصمة عار

1- قم بإعداد لطاخة مباشرة من العينة ، والتي يمكن أن تكون البلغم أو السائل الرئوي أو رواسب البول أو السائل النخاعي أو البراز ، من بين أشياء أخرى ؛ أو من تعليق الكائنات الحية الدقيقة التي تم الحصول عليها من مستعمرات نقية نمت في وسائل الإعلام الثقافة الأولية.

2- ثبت اللطاخة بالحرارة.

3- ضعي اللطاخة على جسر التلوين وغطّيه باستخدام كاشف فوشين الفينيقي من Kinyoun. دعه يستريح لمدة 3 أو 5 دقائق.

4- اغسل بالماء المقطر.

5. التبييض مع الكحول الحمضي لمدة 3 دقائق ويغسل بالماء المقطر مرة أخرى

6 - التبييض مرة أخرى مع الكحول الحمضي لمدة 1 أو 2 دقيقة حتى لا يتم سحب أكثر صبغة.

7- اغسل بالماء المقطر واتركها تصب ، ووضع الشريحة في الوضع الرأسي.

غطي المستحضر بالميثيلين الأزرق واتركه لمدة 4 دقائق.

9- اغسل بالماء المقطر واتركه يجف.

10- فحص في 40X ثم في 100X.

إذا كنت ترغب في تحسين وتسريع تلطيخ الكائنات الحية الدقيقة سريعة الحمض ، أضف قطرة واحدة من عامل الترطيب (مثل tergitol رقم 7) إلى 30 أو 40 مل من Finysine Kinyoun حمض الفينيك.

بعض المختبرات تغيير صبغة التباين الأزرق الميثيلين للحمض الأخضر أو ​​حمض البيكريك ؛ الأول يعطي لونًا أخضر للخلفية والثاني يولد لونًا أصفر.

Kinyoun تقنية خاصة ل Nocardias

لتحسين تلطيخ بكتيريا نوكارديا ، يتم استخدام تعديل تلطيخ كينيون. هذه التقنية هي كما يلي:

1 - قم بتغطية اللطاخة بخدش الكينون الفينولي لمدة 3 دقائق.

2- يغسل بالماء المقطر.

استحى لفترة وجيزة مع 3 ٪ من الكحول الحمضي حتى لا يتم صبغ أكثر.

4- اغسل مرة أخرى بالماء المقطر.

غطي المستحضر بالميثيلين الأزرق واتركه لمدة 30 ثانية.

6- اغسل بالماء المقطر واتركه يجف.

الجمع بين تقنية الفينول وثلاثي الألوان ثلاثي تعديل من قبل ديدييه

يوصى باستخدام هذه التقنية لتحليل عينات البراز بحثًا عن الكوكسيديا وبوغ الميكروسبوريديوم sp في نفس الوقت. الإجراء الواجب اتباعه هو كما يلي:

1 - قم بتغطية اللطاخة بخدش الكينون الفينولي لمدة 10 دقائق.

2 - إزالة الصبغة ويغسل بالماء المقطر.

التبييض لمدة 30 ثانية مع حمض الهيدروكلوريك الكحول.

4- اغسل مرة أخرى بالماء المقطر.

غطي اللطاخة بمحلول ثلاثي الألوان لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية.

6- اغسل بالماء المقطر.

7 - إزالة اللون لمدة 10 ثانية مع حمض الخليك الكحول.

8- اغسل اللطاخة لمدة 30 ثانية باستخدام 95٪ من الإيثانول.

مراقبة الجودة

كعنصر تحكم إيجابي ، يتم تحضير اللطاخات بواسطة سلالات من المتفطرة السلية وملطخة بالكواشف المعدة للتحقق من أن البكتيريا تأخذ اللون الصحيح (الفوشيه الأحمر).

يمكن أيضًا استخدام أدوات التحكم السلبية من خلال إعداد اللطاخات بأي سلالة ليست مقاومة للكحول الحمضي ، وبالتالي التحقق من أن العينة بأكملها تأخذ لون التباين.

تقنية Kinyoun مقارنة بتقنية Ziehl -Neelsen

تقنية Kinyoun أبسط لأنها تلغي خطوة التدفئة ، لكن ميزتها الرئيسية هي أنها تمنع انبعاث الأبخرة شديدة السمية وتسبب السرطان على المدى الطويل. لذلك ، تلطيخ Kinyoun هو أكثر أمانا للموظفين المسؤولين عن تلطيخ.

من المهم أن نأخذ في الاعتبار أنه من الضروري توخي الحذر من أن الكواشف لا تتلامس بشكل مباشر مع الجلد ، لأنها قابلة للتآكل والتبييض قابل للاشتعال.

فيما يتعلق بالعيوب ، لا تشير اللطاخة السلبية بالضرورة إلى أن الكائنات الحية الدقيقة غير موجودة. بالإضافة إلى ذلك ، فإن وجود مخلفات الخلية يمكن أن يسبب إيجابيات كاذبة ، الأمر الذي يولد البلبلة في التشخيص.

إشارة

  1. الكيمياء السريرية التطبيقية (2016). BK Kinyoun Kit. متاح في: cromakit.es
  2. أوروزكو ريكو ميغيل. Kinyoun وصمة عار واثنين من الكوكسيديا في فيروس نقص المناعة البشرية. المجلة الطبية MD. عام 2011؛ 3 (2): 137
  3. Forbes B، Sahm D، Weissfeld A (2009). التشخيص الميكروبيولوجي لبيلي وسكوت. 12 إد. الأرجنتين. افتتاحية Panamericana SA
  4. Koneman E، Allen S، Janda W، Schreckenberger P، Winn W. (2004). التشخيص الميكروبيولوجي. (الطبعة الخامسة). الأرجنتين ، التحرير Panamericana SA
  5. المساهمون في ويكيبيديا. «Kinyoun stain.» ويكيبيديا ، الموسوعة الحرة . ويكيبيديا ، الموسوعة الحرة ، 8 فبراير 2018. الويب. 5 يناير 2019.
  6. Combol A و Fernández N و Figueredo E و Acuña A و Zanetta E. تنفيذ تقنية تلوين للتشخيص المتزامن ل Coccidia و Microsporidia. معهد النظافة بجامعة الجمهورية. مونتيفيديو. أوروغواي. متاح في: higiene.edu.uy