مرق Tetrathionate: الأساس ، إعداد واستخدامات

مرق رباعيونيت أو مرق TT هو وسيلة سائلة انتقائية لإثراء واستعادة سلالات السالمونيلا. تم إنشاؤه بواسطة Müeller وتم تعديله لاحقًا بواسطة Kauffmann ، ولهذا السبب هناك من يطلق عليه مرق Müeller-Kauffmann.

الوسط الأصلي يحتوي على ببتونات البروتينات وكربونات الكالسيوم وثيوسلفات الصوديوم. وأضاف كوفمان أملاح الصفراء وخلق طريقة أخرى مع الأخضر الفاتح. هذه المواد تمنع نمو القولونيات ، تاركة الوسيلة خالية لتطوير البكتيريا المسببة للأمراض ، في هذه الحالة السالمونيلا.

كان التعديل ناجحًا للغاية لأنه زاد بشكل كبير من حساسية الوسط. لهذا السبب ، فإنه مفيد حاليًا للبحث عن السالمونيللا في أي نوع من العينات ، ولكن خصوصًا البراز الصلب أو السائل والأطعمة.

يتكون تحضيرها من مرحلتين ؛ الوسيط التجاري هو قاعدة لإعداد مرق رباعي المفعول ، وبعد ذلك يتم تكوين مخلوط من اليود المضاف إلى اليود الذي يكمل الوسط.

توصي جمعية الصحة العامة الأمريكية (APHA) باستخدام مرق التراثيونات المضاف إلى اللون الأخضر اللامع لإثراء العينات في البحث عن السالمونيلا ، لأنه أكثر انتقائية من مرق التراثيونات ومرق السيلانيت.

بشكل عام ، يعتبر مرق التراثيونات مثاليًا عندما يشتبه في أن بكتيريا جنس السالمونيلا بكميات صغيرة أو يتم إساءة استخدامها من خلال التعرض للمواد المثبطة أو من خلال العمليات الصناعية التي تقلل من صلاحيتها.

مؤسسة

تتوافق الببتونات الحالية مع الهضم البنكرياس الكازيني والهضم الهضمي للأنسجة الحيوانية. هذه توفر مصدر الكربون والنيتروجين والمواد الغذائية بشكل عام لنمو البكتيريا.

من جانبها ، يتفاعل ثيوكبريتات الصوديوم مع المحلول المعالج باليود لتشكيل التراثيونات. هذا يمنع نمو القولونيات ويفضل تطور البكتيريا التي تحتوي على إنزيم رباعيون الإنزيم المختزل ، من بينها جنس السالمونيلا ، ولكن أيضًا البروتي.

تعمل أملاح الصفراء أيضًا كمادة مثبطة لمعظم البكتيريا الموجبة للجرام وبعض البكتيريا سالبة الجرام (القولونيات).

كربونات الكالسيوم تمتص المواد السامة الناتجة عن تحلل رباعيونات ، الذي يشكل حمض الكبريتيك. في هذا المعنى ، تحيد كربونات الكالسيوم الحموضة التي تحافظ على درجة الحموضة للمستقر المتوسط.

في حالة الطريقة الخضراء الزاهية ، تزيد هذه المادة من القوة الانتقائية لمرق التراثيونات عن طريق تثبيط الكائنات الحية الدقيقة الأخرى بخلاف جنس السالمونيلا.

إعداد

- تتراثيونات

محلول اليود

نأسف:

  • 6 غرام من اليود.
  • 5 غرام من يوديد البوتاسيوم.

يذوب يوديد البوتاسيوم في حوالي 5 مل من الماء المقطر المعقم ، ثم يضاف اليود شيئًا فشيئًا أثناء تسخين الخليط. بعد ذوبانه بالكامل ، يتم ملؤه بماء مقطر معقم حتى يصل إلى الحجم النهائي البالغ 20 مل.

قاعدة نصف لمرق التتراثيونات

تزن 46 جرام من المتوسط ​​المجفف وتعلق في 1 لتر من الماء المقطر المعقم. يُمزج ويُسخن حتى يذوب تمامًا ، يمكن أن يغلي لبضع دقائق فقط. لا تعقم في الأوتوكلاف. يُسمح بتبريد قاعدة الوسيط إلى حوالي 45 درجة مئوية وفي ذلك الوقت يتم إضافة 20 مل من محلول اليود.

بعد إضافة الحل يودورادا إلى المتوسط ​​يجب أن تستخدم على الفور. إذا كنت لا تريد استخدام الخليط بالكامل ، تابع ما يلي:

يتم توزيع 10 مل من الوسط الأساسي في الأنابيب ، ويتم إضافة 0.2 مل فقط من المحلول المعالج باليود إلى تلك المراد تطعيمها بالعينات.

يمكن تخزين تلك التي لن يتم استخدامها في الثلاجة ، ولكن بما أن الوسيلة غير معقمة ، فإن المثل الأعلى هو إعداد الكمية المطلوبة بالضبط.

لون الوسط قبل إضافة محلول اليود أبيض اللون حليبي مع ترسبات بيضاء وبعد إضافة اللون البني مع ترسبات كثيفة. يكون الترسيب الملاحظ طبيعيًا ويتوافق مع كربونات الكالسيوم التي لا تذوب. الرقم الهيدروجيني النهائي للوسط هو 8.4 ± 0.2.

مرق رباعيون مختلف مع الأخضر الفاتح

لتحضير مرق رباعي الإيثيل مع اللون الأخضر الفاتح ، يتم تنفيذ جميع الخطوات الموضحة أعلاه ، ولكن بالإضافة إلى ذلك ، سيتم إضافة 10 مل من المحلول الأخضر اللامع المحضر بنسبة 0.1٪ إلى الخليط.

أخضر ساطع

يتم إعداد هذا الحل على النحو التالي:

تزن 0.1 غرام من الأخضر الفاتح وتعلق في 100 مل من الماء المقطر. الحرارة حتى الغليان لتحقيق حلها التام. حفظ في زجاجة العنبر.

استعمال

بالنسبة لعينات البراز (ثقافة البراز) ، يكون البروتوكول كما يلي:

تطعيم 1 غرام من البراز الصلب أو 1 مل من البراز السائل في أنبوب مع 10 مل من مرق tetrathionate الجاهزة للاستخدام. يهز بقوة واحتضان في aerobiosis في 43 درجة مئوية لمدة 6-24 ساعة.

في وقت لاحق ، تأخذ قسامة من 10 إلى 20 ميكرولتر من المرق وثقافته في انتقائية متوسطة للسالمونيلا ، مثل أجار SS ، أجار XLD ، أجار أخضر مشرق ، أجار هيكتون المعوي ، من بين آخرين.

في موازاة ذلك ، ينبغي تلقيح الوسائط الانتقائية للسالمونيلا مع العينة المباشرة (البراز) دون إثراء. بالنسبة لعينات مسحات المستقيم ، قم بإفراغ المواد التي تم جمعها في الأنبوب والمضي قدمًا كما هو موضح أعلاه.

بالنسبة لعينات الطعام ، تزن 10 غرامات من الأطعمة الصلبة أو 10 مل من الطعام السائل وتطعيم قارورة تحتوي على 100 مل من مرق التراثيونات الجاهز للاستخدام. تابع بنفس الطريقة الموضحة أعلاه ولكن احتضان عند 37 درجة مئوية

كما يتضح ، فإن العلاقة بين العينة والمرق ستكون دائمًا 1:10.

مراقبة الجودة

من أجل اختبار وسيط الاستزراع ، يمكن استخدام سلالات التحكم المعروفة. الأكثر شيوعا هي سلالات ATCC المعتمدة.

السلالات التي سيتم استخدامها هي السالمونيلا التيفيموريوم ATCC 14028 ، السالمونيلا أبوني DSM 4224 ، السالمونيلا Enteritidis ATCC 13076 ، الإشريكية القولونية ATCC 25922 ، Enterococcus faecalis ATCC 19433 و Staphylococcus aureus ATCC 25923.

من المتوقع حدوث تطور ممتاز في سلالات السالمونيلا ، في حين أن الإشريكية القولونية قد يكون لديها تطور ضعيف أو منتظم ، وتكون السلالات الإيجابية للجرام (المكورات المعوية والمكورات العنقودية) مثبطة جزئياً أو كلياً.

توصيات

- لأن هذه الوسيلة لا تمنع نمو البروتيوس ، تستخدم بعض المختبرات 40 ملغ / لتر من النوبيوبيوسين لمنع تطور هذه السلالة الميكروبية. يجب إضافة المضادات الحيوية قبل محلول اليود المعالج باليود.

- بعد تحضير الوسيلة بما في ذلك المحلول المعالج باليود ، يجب ألا تزيد عن ساعتين قبل تلقيحها.

- في لحظة توزيع الوسيط في الأنابيب ، يجب تجانس الخليط بشكل متواصل لإعادة تعليق الرواسب المشكلة.

- في العينات الأقل تلوثًا ، يتم تحضين مرق رباعيون في 35-37 درجة مئوية ، ويوصى في حضانة العينات الملوثة بدرجة عالية عند 43 درجة مئوية.