أندو إندو: الأساس ، الإعداد والاستخدام

Endo agar أو Endo medium هي وسيطة ثقافية متمايزة مع درجة معينة من الانتقائية. تم إنشاء الصيغة الأصلية بواسطة إندو في عام 1904 للتمييز بين البكتيريا التي تخمر اللاكتوز عن البكتيريا غير المخمرة. في البداية ، تم تصميمه لعزل السالمونيلا التيفية ، ولكن فيما بعد تحول هدف الوسط إلى البحث عن القولونيات.

تم الحفاظ على مبدأ Endo agar ، لكن صيغته شهدت تغيرات لا حصر لها على مر السنين. حاليا ، يتكون الوسط من أنسجة هضمية من الببتيد ، لاكتوز ، فوسفات هيدروجين ثنائي البوتاسيوم ، كبريتيت الصوديوم ، فوشين وأجار أساسيين.

تم ربط الاستخدام الرئيسي للوسيلة بعزل وتمايز عصيات الجرام السلبية المنتمية إلى عائلة Enterobacteriaceae والأسر المجاورة الأخرى.

لفترة طويلة تم استخدامه في الكشف عن القولونيات في عينات المياه والألبان والمواد الغذائية ، ولكن في الوقت الحاضر تم استبدال هذه الوسيلة من قبل الآخرين من وظائف مماثلة. ومع ذلك ، تستخدم بعض مختبرات الأحياء الدقيقة هذه الآجار لعزل البكتيريا المعوية من عينات من أصل سريري.

مؤسسة

يحتوي Endo agar على الببتونات التي تعمل كمصدر للأحماض الأمينية والنيتروجين والكربون والطاقة ، وهي ضرورية لنمو الكائنات الحية الدقيقة منخفضة الطلب.

من ناحية أخرى ، يتم توفير الطابع الانتقائي قليلاً للأجار من خلال إضافة كبريتيت الصوديوم والفوكسين الأساسي ؛ كلا المكونين يمنعان جزئيا أو كليا تطور معظم البكتيريا إيجابية الجرام.

يتم إعطاء الطابع التفاضلي من خلال وجود الكربوهيدرات المخمرة ، والتي في هذه الحالة هي اللاكتوز والفوكسين الأساسي ، والذي يعمل أيضًا كمؤشر على الرقم الهيدروجيني.

ستشكل البكتيريا سالبة الجرام التي تنمو في هذا الأجار وتكون قادرة على تخمير اللاكتوز مستعمرات وردية قوية ؛ كونها مرضية من الإشريكية القولونية تشكيل مستعمرات حمراء داكنة مع تألق لامع أخضر لامع. ويرجع ذلك إلى ارتفاع إنتاج الأحماض من تخمير الكربوهيدرات.

تجدر الإشارة إلى أن الوسط المحيط بالمستعمرات يتحول أيضًا إلى لون وردي قوي. بينما الجرام العصي اللاكتوز السلبي غير المخمر تشكل مستعمرات زهرية شاحبة مماثلة للمتوسط ​​أو عديم اللون.

فوسفات هيدروجين الديبوتاسيوم يوازن درجة الحموضة في الوسط والأجار هو المكون الذي يوفر الاتساق الصلب.

إعداد

إندو آجار

تزن 41.5 غرام من المتوسط ​​المجفف وتذوب في 1 لتر من الماء المقطر. تسخين الخليط عن طريق التحريك في كثير من الأحيان حتى يكون هناك حل كامل للوسط. تعقيم في الأوتوكلاف في 121 درجة مئوية ، في ضغط 15 رطلا ، لمدة 15 دقيقة.

عند الإزالة من الأوتوكلاف ، اسمح بالتبرد حتى درجة حرارة 45-50 درجة مئوية تقريبًا ، اهتز الخليط للتجانس قبل التقديم. صب 20 مل في أطباق بتري معقمة.

اترك الألواح صلبة وعكس وتخزينها في صندوق أو لف بالورق الغامق قبل تخزينها في الثلاجة. من المهم جدًا حماية الوسط المعد من الضوء المباشر. الممارسة الموصى بها هي إعداد المبلغ الدقيق الذي ستكون هناك حاجة إليه.

إذا تم تخزينها في الثلاجة ، فيجب ترطيب الألواح قبل الاستخدام.

يجب أن يتراوح الأس الهيدروجيني للوسيط بين 7.2 إلى 7.6 ولون الوسيط المعد بلون وردي باهت.

البديل أجار م إندو

هناك إصدار آخر من Endo agar (m-Endo) يتبع صيغة McCarthy و Delaney و Grasso ، والذي يحتوي على مزيد من المركبات ويختلف في شكل تحضير.

يحتوي هذا البديل على: اللاكتوز ، التريبتوز ، الهضم الأنزيمي للالكازين ، الهضم الأنزيمي للأنسجة الحيوانية ، كلوريد الصوديوم ، فوسفات البوتاسيوم الديباسي ، كبريتات الصوديوم ، مستخلص الخميرة ، أحادي فوسفات البوتاسيوم ، الفوشين الأساسي ، سلفات الصوديوم البوتاسيوم من الصوديوم وأجار.

في هذه الحالة ، يتم وزن 51 جم من الوسط المجفف وتعليقه في 1 لتر من الماء المقطر الذي يحتوي على 20 مل من الإيثانول.

تسخينه قليلا مع التحريك حتى يذوب الوسيط تماما. لا تسخن ولا تعقم في الأوتوكلاف. بمجرد أن يصبح الخليط متجانسًا ، يُقدَّم في أطباق بتري المعقمة ويسمح للتصلب.

استعمال

في بعض البلدان ، لا يزال يستخدم في حساب القولونيات الكلية والبرازية في عينات المياه والغذاء ، وخاصة وجود الإشريكية القولونية كمؤشر رئيسي للتلوث البرازي.

أوصت M-Endo agar من قبل الجمعية الأمريكية للصحة العامة (APHA) لرصد ومراقبة برامج التطهير ومعالجة مياه الصرف الصحي ، وكذلك في تقييم جودة مياه الشرب.

الطريقة الأكثر استخدامًا هي ترشيح الأغشية ، بعد تخصيب العينة مع مرق كبريتات لوريل لمدة 2 إلى 4 ساعات.

يمكن استخدامه أيضًا كبديل عن أجار EMB في التحليل الميكروبيولوجي للغذاء والماء من خلال تقنية الأرقام الأكثر احتمالًا (NMP) ، وتحديداً في المرحلة التأكيدية الكاملة لتأكيد وجود E. coli من مرق EC العكر.

مراقبة الجودة

لتقييم جودة دفعة إندو آجار ، تزرع سلالات السيطرة المعروفة أو المعتمدة.

ومن بين السلالات التي يمكن استخدامها لهذا الغرض: Escherichia coli ATCC 25922 و Escherichia coli ATCC 11775 و Enterobacter cloacae ATCC 13047 و Klebsiella pneumoniae ATCC 13883 و Salmonella typhimurium ATCC 14028 و Shigella flexneri ATCC 12028 .

تزرع السلالات عن طريق الإرهاق وحضنت عند 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة في الأيروبيوس.

النتائج المتوقعة هي:

  • بالنسبة لـ Escherichia coli: مستعمرات حمراء قوية ، ذات لمعان معدني.
  • ل E. cloacae و K. الالتهاب الرئوي يجب أن تكون المستعمرات مخاطي وردي.
  • في حالة S. typhimurium و S. flexneri و P. mirabilis ، عادة ما تكون المستعمرات وردية باهتة أو عديمة اللون.
  • أخيرًا ، من المتوقع أن يتم تثبيط E. faecalis جزئيًا ، وبالتالي يجب أن يكون نموه ضعيفًا مع مستعمرات صغيرة جدًا ذات لون وردي قوي.

القيود

- لدى Endo متوسط ​​قدرة انتقائية منخفضة ، لذلك ، من الممكن أن تنمو بعض الكائنات الحية الدقيقة الإيجابية بالجرام مثل المكورات العنقودية والمكورات المعوية وحتى الخمائر.

- العصيات الأخرى التي لا تنتمي لعائلة Enterobacteriaceae يمكن أن تتطور في هذه الوسيلة ، مثل Pseudomonas sp و Aeromonas sp . خصائص هذه السلالات هي مستعمرات غير منتظمة عديم اللون.

- هذه الوسيلة المعدة حساسة للغاية للضوء ، وبالتالي فإن التعرض لفترات طويلة يؤدي إلى تدهور نظام المؤشر ، مما يؤدي إلى إتلاف الوسيط بشكل لا رجعة فيه.

- تعتبر مكونات البيئة مسببة للسرطان ، لذلك يجب تجنب الاتصال المباشر.

-الوسط المجفف استرطابي للغاية ويجب حفظه في عبوته الأصلية في درجة حرارة الغرفة ، مغلق جيدًا وفي بيئة جافة.