مرق الصويا التريبتي: الأساس والإعداد والاستخدامات

مرق تريبتيكازين الصويا هو وسيط ، مغذي للغاية وغير انتقائي. بسبب تنوعها الكبير ، فهي واحدة من أكثر وسائل الاستزراع السائل استخداما في مختبر الأحياء الدقيقة.

يُعرف أيضًا باسم تريبتيكاز مرق الصويا أو الكازين الصويا المهضوم ، الذي اختصاره هو TSB لمختصراته بالإنجليزية Tryptic Soy Broth أو CST لمختصراته باللغة الإسبانية. استخداماتها متنوعة للغاية بسبب تركيبتها. يتكون من تريبتين ، بيبتون الصويا ، كلوريد الصوديوم ، فوسفات الديبوتاسيوم والجلوكوز.

إنها قادرة على إنتاج البكتيريا المسببة للأمراض المهمة سريريًا ، بما في ذلك البكتيريا اللاهوائية التي تتطلب الكثير من الناحية التغذوية. يمكن أن تتطور بعض الفطريات الانتهازية والملوثات في هذه الوسيلة.

نظرًا لقوتها الغذائية العالية ، فإن لديها حساسية عالية للكشف عن التلوث الجرثومي ، ولهذا السبب تم اختيارها من قبل إدارة فحص صحة الحيوان والنبات التابعة لوزارة الزراعة الأمريكية لتحليل الميكروبيولوجي للقاحات.

وبالمثل ، فإن حساء فول الصويا tripticase يفي بمتطلبات مختلف العقاقير الدوائية (EP الأوروبية ، اليابانية JP وأمريكا الشمالية USP) للدراسة الميكروبيولوجية للمنتجات على المستوى الصناعي ، مثل مستحضرات التجميل والمواد الغذائية.

من ناحية أخرى ، تجدر الإشارة إلى أنه على الرغم من فائدته الكبيرة ، فإن هذه الوسيلة غير مكلفة نسبيًا ، مما يجعلها في متناول معظم مختبرات الأحياء الدقيقة. كما أنه سهل التحضير.

مؤسسة

توفر له أدوية التريبتين والببتون والجلوكوز الخواص المغذية الضرورية لتحويله إلى وسيلة مثالية لتطوير الميكروبات بسرعة.

ما يقرب من 6 إلى 8 ساعات من الحضانة يمكن بالفعل أن ينظر إلى النمو في معظم الكائنات الحية الدقيقة. ومع ذلك ، هناك سلالات من النمو البطيء التي يمكن أن تستمر يوما لتنمو.

كلوريد الصوديوم و فوسفات الديبوتاسيوم بمثابة توازن الاسموزية و منظم الرقم الهيدروجيني ، على التوالي. يتضح وجود النمو من خلال ظهور التعكر في الوسط. إذا لم يكن هناك نمو يبقى المتوسط ​​شفافاً.

بسبب لونه الفاتح ، من الممكن مراقبة إنتاج الأصباغ ، مثل تلك الظاهرة في الصورة الموجودة في بداية المقال ، والتي تتوافق مع الصبغة التي تنتجها Pseudomonas aeruginosa.

إعداد

- تريبتيكازين - إستلوز

لإعداد مرق تريبتيكيز فول الصويا ، تزن 30 غراما من الوسط التجاري المجففة على نطاق رقمي. ثم يذوب في لتر من الماء المقطر الموجود في fiola.

يُسمح للخليط بالوقوف لمدة 5 دقائق ثم يتم إحضاره إلى مصدر حرارة للمساعدة في انحلال الوسط. يجب تحريكه كثيرًا أثناء الغليان لمدة دقيقة واحدة.

بمجرد الذوبان ، يتم توزيعه في أنابيب بالحجم المناسب حسب الحاجة. يمكن استخدام الأنابيب ذات المكونات القطنية أو أغطية الباكليت. بعد ذلك ، يتم تعقيم الأنابيب مع الوسط في الأوتوكلاف عند 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة.

يجب أن يكون الرقم الهيدروجيني للمتوسط ​​7.3 ± 0.2

يجب أن يؤخذ في الاعتبار أن لون وسط الاستزراع المجفف لونه بيج فاتح ويجب تخزينه في درجة حرارة تتراوح بين 10 إلى 35 درجة مئوية ، في مكان جاف. أثناء إعداد المرق هو كهرماني خفيف ويجب تخزينه في الثلاجة (من 2 إلى 8 درجات مئوية).

المتغيرات من تريبتيكازين مرق الصويا

يمكن تحضير مرق تريبتيكازين الصويا المعدل عن طريق إضافة أملاح الصفراء ونوفوبيوسين من أجل جعله انتقائيًا لعزل E. coli. هناك خيار آخر لنفس الغرض وهو تحضير مرق تريبتيكاز فول الصويا المضاف إلى الفانكومايسين والسيفيكسيم والتيلوريت (2.5 ميكروغرام / مل).

من ناحية أخرى ، يمكن إضافة المزيد من الجلوكوز (0.25 ٪) إلى مرق تريبتيكازين الصويا عندما يكون الهدف هو تحفيز تكوين الأغشية الحيوية.

استعمال

إنها مغذية بما فيه الكفاية للسماح بنمو البكتيريا الصعبة أو المزعجة مثل Streptococcus pneumoniae و Streptococcus sp و Brucella sp ، دون الحاجة إلى تكملة الدم أو المصل.

وبالمثل ، يمكن أن تتطور بعض الفطريات في هذا المرق ، مثل مجمع المبيضات البيضاء ، Aspergillus sp و Histoplasma capsulatum.

بالإضافة إلى ذلك ، تعتبر هذه الوسيلة في ظل الظروف اللاهوائية مثالية لاستعادة البكتيريا التي تنتمي إلى جنس كلوستريديوم ، فضلاً عن البكتيريا اللاهوائية غير المشبعة ذات الأهمية السريرية.

إذا تم إضافة 6.5 ٪ كلوريد الصوديوم فإنه يمكن استخدامه لنمو المعوية وغيرها من المجموعة د العقديات.

على مستوى البحث ، كان مفيدًا جدًا في العديد من البروتوكولات ، وخاصة في دراسة البكتيريا التي تشكل الأغشية الحيوية أو الأغشية الحيوية. كما أنه يستخدم لإعداد تعليق البكتيري بنسبة 0.5 ٪ من ماك فارلاند اللازمة لأداء المضاد الحيوي عن طريق طريقة كيربي وباور.

في هذه الحالة ، يتم أخذ 3 إلى 5 مستعمرات ذات مظهر مشابه ومستحلب في 4-5 مل من مرق الصويا التربتيكازين. يتم تحضينها بعد ذلك لمدة ساعتين إلى 6 ساعات عند درجة حرارة 35-37 درجة مئوية ، ثم يتم ضبطها وفقًا للتركيز المطلوب باستخدام محلول ملحي معقم. لا ينبغي أن تستخدم مرق تريبتيكاز الصويا لمدة 18 إلى 24 ساعة من الحضانة.

زرعت

يمكن أن تزرع العينة مباشرة أو مستنبتات مستعمرة نقية مأخوذة من وسائط انتقائية. يجب أن يكون اللقاح صغيراً حتى لا يغيم الوسط قبل الحضانة.

يحتضن عادة عند 37 درجة مئوية في aerobiosis لمدة 24 ساعة ، ولكن يمكن أن تختلف هذه الظروف اعتمادا على الكائنات الحية الدقيقة التي يتم البحث عنها. يمكن حضنها أيضًا في ظروف لاهوائية عند 37 درجة مئوية لعدة أيام إذا لزم الأمر. على سبيل المثال ، في الكائنات الدقيقة الصعبة أو البطيئة النمو ، يمكن حضنها لمدة تصل إلى 7 أيام.

في التحليل الميكروبيولوجي للمواد الصيدلانية - مثل اللقاحات - تكون البروتوكولات أكثر صرامة. في هذه الحالات ، لا يتم التخلص من المرق بدون نمو حتى يصل إلى 14 يومًا من الحضانة المستمرة.

مراقبة الجودة

لكل دفعة محضرة ، يجب تحضين 1 أو 2 أنابيب دون تلقيح لإظهار العقم. يجب أن تبقى دون تغيير.

يمكنك أيضا زرع سلالات معروفة لتقييم سلوكهم. من بين السلالات التي يمكن استخدامها هي:

Aspergillus brasiliensis ATCC 1604، Candida albicans ATCC 10231، Bacillus subtilis ATCC 6633، Staphylococcus aureus ATCC 6538 or 25923، Escherichia coli ATCC 8739، Streptococcus pyogenes ATCC 19615، Streptococus pneumoniae ATCC

في جميع الحالات ، يجب أن يكون النمو مرضيًا في ظل ظروف الجو ودرجة الحرارة المناسبة لكل الكائنات الحية الدقيقة.

القيود

-تخمر الجلوكوز يؤدي إلى انخفاض درجة الحموضة في الوسط عن طريق إنتاج الأحماض. قد يكون هذا غير مواتٍ لبقاء بعض الكائنات الحية الدقيقة الحساسة للحموضة.

- لا ينصح بصيانة السلالات ، لأنه بالإضافة إلى الحموضة ، تستنزف البكتيريا بعد بضعة أيام العناصر الغذائية مع ما يترتب على ذلك من تراكم المواد السامة التي تجعل البيئة غير مضيافة.

-يجب أن تعمل مع جميع بروتوكولات العقم ، لأن المرق ملوثة بسهولة.

- بعد تحضير مرق تريبتيكازين الصويا ، لا تحاول نقل المرق إلى أنبوب معقم آخر ، لأن هذا النوع من المناورات يكون عرضة للتلوث.