بابا دكستروز أجار: الأساس ، وإعداد واستخدام

أبا دكستروز أجار هو وسيلة قوية وغير انتقائية ثقافة المغذيات. يمكن أن تنمو الأنواع البكتيرية والفطرية ، ولكن يشار استخدامه خاصة لعزل الفطريات والخمائر الخيطية. يُعرف أيضًا باسم PDA medium بواسطة التعبير الإنجليزي Potato Dextrose Agar.

إنه مفيد بشكل خاص لعزل الفطريات المسببة للأمراض النباتية ، أي تلك التي تؤثر على النباتات. لزرع العينات من النباتات المصابة ، يمكن استخدام وسائط أخرى مثل Sabouraud agar أو malta agar ، ولكن ، للاستخدام الروتيني ، يفضل agar dextrose agar بسبب زيادة التكاثر.

كما أنه يستخدم لحساب المستعمرات الفطرية في عينات من مستحضرات التجميل والأدوية وبعض الأطعمة الألبان. وبالمثل ، من المناسب أن نزرع عينات من كشط الجلد بحثًا عن الخلايا الجلدية ، التي تنمو بشكل جيد جدًا في هذه الوسيلة ، مع تطوير أصباغها المميزة.

إن وسط سكر الدكستروز هو بسيط وسهل التحضير في المختبر. أنه يحتوي ، كما يوحي الاسم ، ضخ البطاطا ، سكر العنب وأجار آجار. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن إضافة المواد المثبطة لمنع نمو البكتيريا وزيادة الانتقائية للأنواع الفطرية.

مؤسسة

بابا دكستروز أجار هو وسيلة الثقافة التي توفر العناصر الغذائية اللازمة لتطوير الفطريات والخمائر الخيطية.

يوفر مزيج تسريب البطاطس مع الجلوكوز مصدرًا مثاليًا للطاقة لتحقيق نمو مرضٍ للفطريات. بينما أجار هو الذي يوفر الاتساق إلى المتوسط.

الوسيلة وحدها لا تمنع نمو البكتيريا ، لذلك فهي وسيلة غير انتقائية. لجعلها انتقائية تحتاج إلى إضافة المواد المثبطة مثل حمض الطرطريك أو المضادات الحيوية.

إعداد

- محلية الصنع (غير التجارية) إعداد بابا آكستروز أجار

أطباق بتري

يتم تحضيرها بالطريقة التالية:

بادئ ذي بدء ، تغسل البطاطس جيدًا ، وتزيل الأوساخ الموجودة لديها. يتم تقطيعها إلى شرائح رقيقة مع كل شيء وقذيفة. يتم وزن 200 غرام من البطاطا وتوضع في الغليان في لتر من الماء المقطر لمدة نصف ساعة.

بعد مرور الوقت يتم تصفيته أو توتره كل المستحضر من خلال الشاش.

يكتمل السائل الناتج بالماء المقطر حتى يصل إلى لتر واحد. إلى التسريب ، تتم إضافة 20 غراما من أجار أجار و 20 غراما من سكر العنب ، وتخلط جيدا وتعقيمها في 121 درجة مئوية ، في 15 رطلا من الضغط لمدة 15 دقيقة.

السماح لتبرد إلى 50 درجة مئوية ويقدم في أطباق بتري معقمة. يتم تخزين اللوحات المعدة في الثلاجة.

الأوتاد

يمكنك أيضًا تحضير أسافين أجار بابا الدكستروز.

في هذه الحالة ، قبل التعقيم في الأوتوكلاف ، يتم وضع 12 إلى 15 مل من الوسط في أنابيب ، ثم يتم تعقيمها وتركها مستلقية على دعامات خاصة حتى تصلب. حفظ في الثلاجة.

يبقى المتوسط ​​عند درجة الحموضة 5.6 5.6 0.2 ، ومع ذلك ، تضيف بعض المختبرات حمض الطرطريك 10 ٪ لخفض الرقم الهيدروجيني إلى 3.1 ± 0.1 من أجل منع نمو البكتيريا.

وبهذا المعنى ، تفضل المختبرات الأخرى إضافة المضادات الحيوية لجعلها انتقائية لزراعة الفطريات ومنع تطور البكتيريا.

-إعداد التجارية أجار دكستروز بابا

يزن 39 جم من الوسط المجفف المتاح تجاريا ويذوب في لتر واحد من الماء المقطر. يترك للراحة لمدة 5 دقائق.

يسخن الخليط عن طريق التحريك بشكل متكرر حتى يذوب بالكامل. بعد ذلك ، يتم تعقيمها في اﻷوتوكﻻف عند ١٢١ درجة مئوية لمدة ١٥ دقيقة.

لوحات أو أسافين يمكن إعدادها. تابع كما هو موضح أعلاه.

يبقى الرقم الهيدروجيني عند 5.6 ± 0.2. إذا كان الرقم الهيدروجيني 3.1 مطلوبًا ، يجب إضافة 14 مل من حمض الطرطريك المعقم بنسبة 20٪ قبل التقديم على الأطباق.

لون الوسط غير مستعد للبيج وإعداده كهرماني فاتح مع مظهر غائم قليلاً أو براق.

تطبيقات

عملية زراعة عينات النبات في أجار سكر العنب

للأوراق مع البقع

يتم قطع الأوراق إلى قطع.

في كوب 50cc مع الكحول بنسبة 50 ٪ ، ضع قطعة من الأوراق (قطعة ملطخة وصحية) ، لتطهير السطح لمدة 20 إلى 30 ثانية. اسحب الكحول وأضف هيبوكلوريت الصوديوم إلى 20٪ لمدة 40 إلى 50 ثانية إذا كانت الأوراق رقيقة وتزيد الوقت إلى 80 ثانية إذا كان اللحاء وسجلاته.

سحب هيبوكلوريت الصوديوم وتأخذ مع مقطع معقمة القطع المطهرة ووضعها على سطح المتوسط ​​(بحد أقصى 10 قطعة). ضع التاريخ واحتضانه من 20 إلى 30 درجة مئوية.

للحصول على الفواكه والدرنات

إذا كانت الثمرة سمينًا ، فافتح الفاكهة المتأثرة بالفطريات وأخذ قطعًا بمشرط معقم ، مريض وصحي على حد سواء وضعه على سطح الأجار.

إذا كانت الثمار الحمضيات ، مثل الليمون أو البرتقال ، فيجب عليك فتح بذورك وزرعها.

عندما يتأثر سطح الثمرة ويلاحظ وجود جراثيم ، فمن الأفضل استخدام الطريقة المبشورة على اللوحة ؛ يتكون هذا من لمس الجراثيم بملعقة في شكل "L" معقم وتبريده ، ثم إجراء البذر المتعرج مرتين إلى ثلاث مرات على الإغار.

للحصول على الحبوب

يتم تطهيرها كما هو موضح في الأوراق ثم يتم وضعها على أجار.

للفروع والسيقان

يتم إجراء تجريف اللحاء ثم يتم أخذ قطع من الجزء الصحي والمرض وتزرع مباشرة على أجار.

يتم تحضين اللوحات المزروعة في الأيروبيوس في درجة حرارة 20-30 درجة مئوية لمدة 72 ساعة.

عملية لزراعة عينات من الجلد والشعر أو قشور الأظافر على أجار سكر العنب بابا

يجب أخذ العينة باستخدام شفرة مشرط رقم 11 ، إما لقص الشعر المصاب ، أو تقشر الجلد أو الأظافر بحثًا عن الخلايا الجلدية. قبل أخذ العينة ، يجب تطهير المنطقة بنسبة 70٪ من الكحول.

- عينة الجلد

في الآفات المتقشرة ، يجب أن تكون حافة الآفة مكشوفة ، لأن الفطر من المحتمل أن يوجد هناك.

في الآفات نضحي تؤخذ العينة مع مسحة جافة أو رطبة. تزرع على الفور أجار سكر العنب أو أجار سابورو. تجنب وسائل النقل.

طريقة أخرى لأخذ العينات هي من خلال تقنية مربع السجاد في Mariat و Adan Campos. في هذه الحالة ، يفرك المنطقة المصابة 5 مرات بقطعة من الصوف المعقم لمزيد من الزراعة.

يمكن وضع العينة مباشرة في وسط الثقافة.

- عينة الشعر

اعتمادا على علم الأمراض ، قد يتم قطع الجزء المصاب أو تمزيقه من قبل الجذور. ضع العينة في وسط الثقافة.

- عينة الظفر

يمكنك كشط أو قص جزء معين من الظفر المصاب. سوف يعتمد على نوع الإصابة.

قطع العينة إلى 1 ملم قطع قبل البذر من أجل زيادة احتمال ملامسة الفطريات مع وسط الثقافة.

إجراءات تحديد الهوية

يتم عزل المستعمرات التي تم الحصول عليها في الصفيحة في أنابيب تحتوي على أجار سكر عجينة الدكستروز لإجراء الدراسة العيانية للمستعمرات (المظهر واللون والاتساق ودرجة التطور).

يمكن إجراء الدراسة المجهرية (مراقبة البنى وتشكيلاتها) بواسطة الثقافات الدقيقة أو الملاحظة المباشرة تحت المجهر بين الرقاقة واللاميلا.

مستعمرة العد

يمكن استخدام هذه الوسيلة أيضًا لتحديد حجم الفطريات والخمائر الموجودة في عينات النباتات أو الأطعمة أو مستحضرات التجميل أو الأدوية. لهذا الغرض ، يتم استخدام أجار بابا الدكستروز المضاف إلى المضادات الحيوية ، مثل: (كلورامفينيكول ، كلوروتيتراسيكلين أو كليهما).

صب 1 مل من العينة - ويفضل أن تكون مخففة - في طبق بتري معقم وفارغ ، ثم تذوب سدادة أجار دكستروز البطاطا وتترك لتبرد حتى 45 درجة مئوية اسكب طبق بيتري وادوره حتى يتجانس. اتركه في حالة راحة حتى يتجمد.

احتضان في aerobiosis في 20-25 درجة مئوية (قوالب) أو في 30-32 درجة مئوية (الخميرة) لمدة 5 إلى 7 أيام أو أكثر ، وهذا يتوقف على نوع الفطريات التي يجري البحث ونوع العينة. يمكن استخدام صفيحتين لاحتضان كل من درجات الحرارة.

صيانة السلالات الفطرية

يمكن استخدام آغار بابا الدكستروز للحفاظ على سلالات فطرية قابلة للحياة لعدة سنوات.

للقيام بذلك ، تزرع الفطريات في أساف آجار سكر العنب بابا وبمجرد أن تنمو الفطريات ، يتم تغطيتها بالزيوت المعدنية. يجب تعقيم الزيت في الأوتوكلاف لمدة 45 دقيقة ، ولزوجته تقريبية من 300 إلى 330 سايبولت. يجب أن يتجاوز الزيت طرف المائل بمقدار 1 إلى 2 سم.

مراقبة الجودة

من كل دفعة معدة يجب أن تؤخذ لوحة واحدة أو طبقين وتحضنها عند درجة حرارة 25 مئوية لمدة 48 ساعة أو عند 20 درجة مئوية لمدة 96 ساعة. السيطرة الجيدة على العقم هي التي لا تتطور فيها المستعمرات.

سلالات التحكم المعروفة أو المعتمدة أيضًا مثل:

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763، Candida albicans ATCC 10231، Aspergillus brasiliensis ATCC 16404، Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533. ومن المتوقع حدوث نمو جيد في جميع الحالات.