هيكتن آجار: الأساس والإعداد والاستخدامات

Hektoen agar أو المعوي Hektoen agar هو ثقافة صلبة وانتقائية وتفضيلية. تم إنشاؤه في معهد Hektoen بواسطة King و Metzger لعزل البكتيريا المسببة للأمراض من جنس Shigella و Salmonella.

يتكون الوسط من بيبتوز البروتينات ، خلاصة الخميرة ، أملاح الصفراء ، اللاكتوز ، السكروز ، ساليسين ، ثيوكبريتات الصوديوم ، كلوريد الصوديوم ، سترات الحديد ، سترات الأمونيوم ، الأزرق البروموثيمول ، حمض الفوشين والأجار. هذه الصيغة تسمح للتمييز بين الأجناس الشيغيلة والسالمونيلا عن بقية البكتيريا القادرة على النمو في هذه الوسيلة.

على الرغم من وجود وسائط أخرى لها نفس وظيفة Hektoen agar ، إلا أن لها ميزة أكبر مقارنة بالوسائط الأخرى ، خاصةً عندما تريد استرداد أنواع Shigella.

أنواع كلا النوعين تنتج مشاكل معوية حادة لدى البشر بسبب استهلاك الأغذية الملوثة ؛ وبالتالي فإن انتقال البراز - عن طريق الفم. هذا هو السبب في أن استخدام Hektoen agar مبين بشكل أساسي في التحليل الميكروبيولوجي لعينات البراز والغذاء.

مؤسسة

يحتوي Hektoen agar على الببتون وخلاصة الخميرة كمصدر للعناصر الغذائية ، مما يوفر العناصر الأساسية للتنمية الميكروبية.

ومع ذلك ، فإنه يحتوي أيضًا على أملاح الصفراء التي تعمل عن طريق تثبيط نمو بعض البكتيريا ، وخاصة الجرام الإيجابي وبعض الجرام سالبة. ولهذا السبب تعتبر وسيلة انتقائية.

من ناحية أخرى ، Hektoen agar هي وسيلة تفاضلية. يتم منح هذه الخاصية من خلال وجود الكربوهيدرات المخمرة مثل اللاكتوز والسكورة والساليسين ، جنبا إلى جنب مع نظام مؤشر الرقم الهيدروجيني ، ويمثلها البروموثيمول الأزرق والحمض fuchsin.

جميع البكتيريا القادرة على النمو في هذه الوسيلة التي لا تنتمي إلى جنس السالمونيلا والشيجيلا ستطور مستعمرات السلمون أو البرتقال باستثناء جنس البروتيوس. ويرجع ذلك إلى تخمير واحد أو عدة من الكربوهيدرات الموجودة ، والتي تحمض الوسط ، مما يؤدي إلى تحول مؤشر الرقم الهيدروجيني.

من جانبها ، لا يستطيع جنس Shigella و Salmonella تخمير أي من الكربوهيدرات الموجودة ، باستخدام الببتونات فقط كمصدر للطاقة ، مما يجعل البيئة قلوية وبالتالي تكون مستعمراتها باللون الأزرق والأخضر.

أيضا في هذه الوسيلة يمكن تمييز البكتيريا القادرة على تشكيل كبريتيد الهيدروجين (غاز عديم اللون). يعمل ثيوكبريتات الصوديوم كمصدر للكبريت في حين أن سترات الحديد هي عامل الكشف. كلا المركبين يتيحان تشكيل رواسب سوداء لكبريتيد الحديد الذي يثبت التفاعل.

الرواسب السوداء في وسط المستعمرة مع هالة شفافة حول يعطي مظهر عين السمكة. هذه الخاصية تشير إلى وجود جنس السالمونيلا.

أخيرًا ، يحتفظ كلوريد الصوديوم بالتوازن الاسموزي ويعطي الأجار ثباتًا ثابتًا في الوسط.

إعداد

تزن 76 غرام من المتوسط ​​المجفف وتذوب في لتر واحد من الماء المقطر. هز الخليط بقوة واتركه يستريح لمدة 10 إلى 15 دقيقة. يمكن تسخينها وغليها ، مما يعطي حركات دوارة حتى انحلالها التام. لا يتم تعقيم هذه الوسيلة في الأوتوكلاف.

عندما تصل درجة الحرارة المتوسطة إلى حوالي 45 درجة مئوية ، يتم سكب حجم 20 مل مباشرةً في أطباق بتري العقيمة.

أجار يسمح لتصلب. في ذلك الوقت هم جاهزون للاستخدام. ينصح باستخدامها على الفور. إذا لم تكن ممكنة ، يتم الاحتفاظ بها في الثلاجة حتى يتم استخدامها.

يجب إزالة الألواح مبكراً من الثلاجة قبل زرعها لدرجة حرارة الغرفة.

يجب أن يكون الرقم الهيدروجيني للمتوسط ​​7.5 ± 0.2. لون الوسط المجفف أرجواني ومحضر بلون أخضر بني.

استعمال

يوصى باستخدام Hektoen agar للبحث عن بكتيريا جنس Shigella و Salmonella في عينات البراز والطعام.

تزداد بشكل كبير إمكانية عزل هذه البكتيريا إذا تم إثراء العينة سابقًا في مرق خاص ، مثل مرق السيلانيت ، مرق السيلينايت المرق ، مرق التراثيونات ، إلخ.

يجب أن يكون اللقاح قوياً وأن يتم البذر عن طريق الفتنة. يتم تحضين الأطباق عند 37 درجة مئوية لمدة 24 إلى 48 ساعة في الأيروبيوسيس.

يوصى بالاحتضان لمدة 48 ساعة لأن خصائص المستعمرات أوضح لتفسيرها وتمييزها في هذا الوقت.

مراقبة الجودة

لتنفيذ مراقبة الجودة على هذه السلالات البكتيرية المعتمدة ، يتم استخدام السالمونيلا التيفيموريوم ATCC 14028 و Salmonella enteritidis ATCC 13076 و Shigella flexneri ATCC 12022 و Shigella sonnei ATCC 25931.

النتائج المتوقعة هي كما يلي: يجب أن يطور السالمونيلا التيفية و السالمونيلا المعوية مستعمرات خضراء زرقاء مع أو بدون مركز أسود. في حين أن الأنواع Shigella ستنمو كمستعمرات زرقاء وخضراء.

قد يتم أيضًا تضمين سلالات الإشريكية القولونية ATCC 29212 و Proteus mirabilis و Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 و Enterococcus faecalis ATCC 29212 و Staphylococcus aureus ATCC 25923.

في هذه الحالات ، تكون الخصائص المرصودة هي التالية: تقوم E. coli و K. pneumoniae بتطوير مستعمرات السلمون إلى البرتقال في هذه الوسيلة ، مع ترسب من نفس اللون من حوله. وفي الوقت نفسه ، سوف تطور Proteus مستعمرات زرقاء وخضراء مع أو بدون مركز أسود.

بينما يجب تثبيط S. aureus و E. faecalis ، في بعض الأحيان E. faecalis تمكن من النمو كمستعمرات صفراء صغيرة جدًا.

من ناحية أخرى ، نظرًا لأن هذا الوسيط لا يتم تعقيمه في الأوتوكلاف ، فمن المهم تقييم عقم الوسط. لذلك ، يجب تحضين كل دفعة محضرة من لوحة إلى صفحتين دون تلقيح عند 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة في الأيروبيوسيس.

من الواضح أنه لا يوجد نمو من أي نوع على اللوحة.

القيود

-أنواع البروتي يمكن أن تتطور في هذه البيئة ويمكن الخلط بين خصائص مستعمراتها وأنواع السالمونيلا أو الشيجيلا. لهذا السبب يجب تأكيد كل مستعمرة مشبوهة من خلال الاختبارات الكيميائية الحيوية.

- من الضروري أن تصاحب استخدام هذه الوسيلة مع أجار أقل انتقائية أخرى ، لأنه إذا تم العثور على الكائنات الحية الدقيقة المطلوبة بتركيزات منخفضة ، فقد لا تتطور في هذه الوسيلة.

لا تسخن أثناء تحضيرها ، لأن الحرارة الزائدة تغير من تكوين المتوسط.

- يمكن أن تظهر مستعمرات السالمونيلا المخمرة لللاكتوز في الغالب دون أن يلاحظها أحد.