ماء الببتون: الأساس ، الإعداد والاستخدامات

ماء الببتون هو وسيلة تخصيب سائلة وغير انتقائية ، تستخدم بشكل رئيسي كمخفف لعينات من المواد الغذائية أو غيرها من المواد. هذه الوسيلة من وجهة النظر الكيميائية بسيطة للغاية ، وتحتوي على اللحم الببتوني وكلوريد الصوديوم والماء.

لها قيمة غذائية معينة ، مما يسمح لإثراء العينة. إذا كانت هناك بكتيريا مضروبة فهذا يعني أن لديه القدرة على إصلاح الصلاحية. انها مفيدة بشكل خاص في استعادة البكتيريا التي تنتمي إلى عائلة Enterobacteriaceae.

في حالة استرداد السالمونيلاس ، يوصى باستخدام متغير المياه المخزن بيبونتادا ؛ يعمل هذا كوسيلة للإثراء المسبق للعينة ، وفي هذه الحالة يحتوي على عناصر أخرى مثل فوسفات الصوديوم وفوسفات الديبوتاسيوم.

عادة ما يتم تحضير ماء البيبونتادا عند درجة الحموضة المحايدة ، ولكن هناك بدائل أخرى حيث يكون الرقم الهيدروجيني هو 8.5 ± 0.2 (القلوية) ، لأن البكتيريا المراد عزلها قلوية ، كما هو الحال على سبيل المثال ضمة الكوليرا

من ناحية أخرى ، يمكن استخدام هذه الوسيلة كوسيلة أساسية لاختبارات تخمير الكربوهيدرات.

مؤسسة

توفر الببتونات العناصر الغذائية اللازمة للتطور البكتيري ، وخاصة النيتروجين والأحماض الأمينية ذات السلسلة القصيرة ، بينما يحافظ كلوريد الصوديوم على توازن تناضحى.

بالإضافة إلى ذلك ، يسمح الوسط بتفريق وتجانس وإصلاح الخلايا البكتيرية التي تضررت من العمليات الصناعية.

كمخفف ، فهو مثالي ، ليحل محل المحلول الفسيولوجي (SSF) أو محلول الفوسفات (PBS) بشكل فعال.

النمو البكتيري واضح من خلال ملاحظة تعكره.

إعداد

إعداد محلية الصنع (غير تجاري)

تزن 1 غرام من الببتون و 8.5 غرام من كلوريد الصوديوم ، يذوب في 1 لتر من الماء المقطر. ينبغي ضبط الرقم الهيدروجيني إلى 7.0. لهذا ، 1 N كلوريد الصوديوم يمكن استخدامها.

التحضير باستخدام الوسط التجاري

تزن 15 غرام من المتوسط ​​المجفف وتذوب في لتر واحد من الماء المقطر. تجانس الخليط. إذا لزم الأمر ، يغلي الخليط لمدة دقيقة واحدة للمساعدة في الذوبان الكامل. يقدم في قارورة 100 مل أو في 10 مل من الأنابيب حسب الحاجة. الأوتوكلاف في 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة.

بارد واستخدامها أو تخزينها في الثلاجة. الرقم الهيدروجيني النهائي للوسيط هو 7.2 ± 0.2.

لون الوسط المجفف لونه بيج فاتح ومجهز باللون الأصفر الفاتح.

التحضير لاختبارات التخمير

إلى المستحضر السابق - قبل التعقيم - يجب إضافة الكربوهيدرات إلى تركيز نهائي قدره 1٪ ، بالإضافة إلى مؤشر Andrade (حمض fuchsin) أو أحمر الفينول (0.018 جم / لتر). يجب وضع جرس دورهام لمراقبة تكوين الغاز على الأنابيب.

متغيرات المياه peptonada الأخرى

- المياه المسننة مخزنة أو مخزنة

أنه يحتوي على الكازين هيدروليزات الأنزيمية ، كلوريد الصوديوم ، فوسفات هيدروجين البوتاسيوم و dodecahydrate فوسفات هيدروجين الصوديوم. الرقم الهيدروجيني النهائي هو 7.0 ± 0.2.

لإعدادها ، تزن 20 غرام من المتوسط ​​المجفف وتذوب في 1 لتر من الماء المقطر. واسمحوا الوقوف لمدة 5 دقائق تقريبا. الحرارة لمدة 1 دقيقة حتى يذوب تماما.

تصب في زجاجات مناسبة حسب الحاجة. تعقيم باستخدام الأوتوكلاف في 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة.

- المياه القلوية المنشطة

تزن 25 غرام من المتوسط ​​المجفف وتذوب في 1 لتر من الماء. تابع كما هو موضح أعلاه. يتراوح الرقم الهيدروجيني من 8.3 إلى 8.7.

استعمال

يتم تنفيذ اللقاح عن طريق وضع العينة مباشرة.

يتم استخدامه لتخفيف العينات ، خاصةً عند الاشتباه في وجود البكتيريا التالفة. بشكل عام ، التخفيفات هي 1:10 و 1: 100.

يتم تحضينها لمدة 24 ساعة في الأيروبيوس في 35-37 درجة مئوية.

عينات البراز

بالنسبة لعينات البراز التي تبحث عن السالمونيلا ، يوصى باستخدام المياه المخزنة مؤقتًا أو المخزنة مؤقتًا كوسيلة للتخصيب المسبق.

للقيام بذلك ، تابع ما يلي:

إذا تم تشكيل البراز ، خذ 1 غرام من العينة. إذا كانت سائلة ، خذ 1 مل من البراز وتعلق في أنبوب مع 10 مل من الماء المغلي المخزن مؤقتًا. في حالة المسحات المستقيمية ، قم بتصريف المادة الموجودة في المسحة في الأنبوب بماء ببتوني مخزّن.

في جميع الحالات ، قم بخلط وتجانس العينة جيدًا.

احتضان عند 37 درجة مئوية لمدة 18 إلى 24 ساعة. بعد ذلك نبت الباطن في مرق التخصيب مثل مرق السيلينيت السيستيني أو مرق التراثيونات في 37 درجة مئوية لمدة 18-24 ساعة. أخيرًا قم بالزراعة في الوسائط الانتقائية للسالمونيلا ، مثل SS agar و XLD agar و Hektoen agar وغيرها.

عينات الغذاء

يتم استخدام مياه الببتون كوسيلة لتخصيب اليورانيوم أو كمخفف بسيط ، ولكن إذا تم البحث عن أنواع السالمونيلا ، يتم استخدامها كوسيلة ما قبل التخصيب ، كما هو موصوف بالفعل.

في الأطعمة المضي قدما على النحو التالي:

للأطعمة الصلبة تزن 25 غرام من العينة وللأطعمة السائلة قياس 25 مل منه. قال جزء في قوارير تحتوي على 225 مل من الماء المملح. خلط وتجانس العينة.

إذا كان هناك شك في أن الحمل الميكروبي عبارة عن تخفيفات تسلسلية عالية أو يمكن إجراء الكسور العشرية لتسهيل عملية حساب وحدات تشكيل المستعمرة (CFU).

يعتمد عدد التخفيفات على نوع العينة والتجربة التحليلية.

على العكس من ذلك ، إذا كان هناك شك في أن الحمل الميكروبي منخفض جدًا ، فليس من الضروري إجراء التخفيفات. في وقت لاحق ، زراعة فرعية في الوسائط الانتقائية.

في حالة الأطعمة من البحر ، مثل المأكولات البحرية ، والأسماك ، وغيرها ، بحثًا عن أنواع الكوليرا Vibrio أو أنواع Vibrio الأخرى ، يجب استخدام مياه البيبونتادا المعدلة إلى الرقم الهيدروجيني 8.5 (الماء القلوي المقطوع).

مراقبة الجودة

من كل دفعة مُعدة ، يجب حضن أنبوب أو أنبوبين دون تلقيح لمدة 24 ساعة في الأيروبيوس عند 37 درجة مئوية. في نهاية الوقت ، لا ينبغي ملاحظة أي تعكر أو تغيير في اللون.

أيضا ، يمكن استخدام سلالات التحكم المعروفة لتقييم فعاليتها:

يمكن استخدام السلالات البكتيرية التالية: Escherichia coli ATCC 25922 ، Escherichia coli ATCC 8927 ، Staphylococcus aureus ATCC 6538 ، Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 ، Salmonella typhimurium ATCC 1428 ، Salmonella enteritidis ATCC 13076 .

في جميع الحالات ، من المتوقع حدوث تطور مرضي للميكروبات ، والذي يلاحظه تعكر الوسط.

القيود

-الوسط المجفف استرطابي للغاية ، لذلك يجب أن تبقى بعيدا عن الرطوبة.

- يجب عدم استخدام الوسيط إذا لوحظ وجود نوع من التدهور.

- يجب تخزين وسط الثقافة المجففة بين 10 - 35 درجة مئوية

- يجب أن تظل الوسيطة المعدة مبردة (2-8 درجة مئوية).