مرق الثيوغليكولات: الأساس ، التحضير والاستخدامات

مرق الثيوجليكوليت عبارة عن وسيط ثقافي غني بتناسق السوائل. يُعرف اختصار FTM باختصاره باللغة الإنجليزية Fluid Thioglycollate Medium. تم إنشاؤه بواسطة Brewer وتعديله في عام 1944 من قبل فيرا ، الذي أدرج بيبتون الكازين.

تتمتع هذه الوسيلة بقدرة منخفضة على الحد من الأكسدة ، ولهذا السبب لا يوصى بتطوير البكتيريا الهوائية الصارمة ، ولكنها مثالية لاستعادة البكتيريا الهوائية الاختيارية والبكتيريا اللاهوائية الدقيقة والميكروفيليك التي لا تتطلب الكثير.

الأداء العالي الذي لوحظ مع هذه الوسيلة في عزل واستعادة مجموعة واسعة من الكائنات الحية الدقيقة ، جعلها مقبولة من قبل دستور الأدوية بالولايات المتحدة (USP) ، والرابطة الرسمية للكيميائيين الزراعيين (AOAC) والدستور الأوروبي للأدوية ( EP).

توصي هذه المنظمات بإجراء اختبارات مراقبة العقم للمنتجات الصيدلانية وإثراء أنواع مختلفة من العينات.

يتكون الثيوكليكولات من مستخلص الخميرة ، الكازين المهضوم للبنكرياس ، سكر العنب اللامائي ، L- السيستين ، كلوريد الصوديوم ، ثيوجليكولات الصوديوم ، ريزازورين والأجار بكميات صغيرة.

هناك العديد من الإصدارات من هذه الوسيلة ، من بينها: مرق الثيوكليكولات مع المؤشر ، مرق الثيوكوليكات بدون مؤشر ، مرق الثيوجليكولات مع مؤشر المخصب مع الهيمين وفيتامين K 1 ، ومرق الثيوغليكولات مع كربونات الكالسيوم.

تجدر الإشارة إلى أن مرق ثيوغليكوليت البديل المخصب بالهيمين وفيتامين K يعمل على تحسين نمو اللاهوائية المطالب ، وأن متغير مرق الثيوجليكولات المحتوي على كربونات الكالسيوم مفيد في مواجهة الأحماض المنتجة أثناء نمو الميكروبات.

مؤسسة

يعتبر مرق الثيوغليكوليت وسيلة لتخصيب اليورانيوم ، غير انتقائية لأنه يسمح بتطوير معظم البكتيريا غير المطلوبة. يتم توفير المتطلبات الغذائية من خلاصة الخميرة وهضم البنكرياس والجلوكوز.

من ناحية أخرى ، تحتوي هذه الوسيلة ، على الرغم من كونها مرقًا ، على كمية صغيرة من الآغار ؛ هذا يجعلها ذات قدرة منخفضة على الحد من الأكسيد ، لأنها تبطئ من إدخال الأكسجين ، بحيث ينخفض ​​الأكسجين كلما تعمق في الأنبوب.

هذا هو السبب في أن هذه الوسيلة مثالية لتطوير البكتيريا الهوائية اللاهوائية والميكروفيلوبية والصلبة اللاهوائية ، هذه الأخيرة 2 دون الحاجة إلى احتضان في ظل هذه الظروف. ينظم الوسط نفسه كمية الأكسجين داخل الوسط ، حيث يتغيب في قاع الأنبوب وبكميات كافية على السطح.

وبالمثل ، يعمل الثيوكليكولايت و L- السيستين كعوامل اختزال ، مما يساهم في منع تراكم المواد الضارة بالتطور البكتيري ، مثل البيروكسيد. بالإضافة إلى ذلك ، تحتوي هذه المركبات على مجموعات سلفيدريل (-SH-) ، تحييد الآثار المثبطة للمشتقات الزئبقية ، الزرنيخين ، والمعادن الثقيلة الأخرى.

من ناحية أخرى ، ريازورين هو مؤشر على تخفيض أكسيد. هذه المادة عديمة اللون عندما يتم تقليلها والوردي عندما تتأكسد. هناك بدائل من مرق الثيوجليكولات مع مؤشر وبدون مؤشر. يعتمد استخدامه على نوع العينة وتفضيل المختبر.

وفي الوقت نفسه ، يحافظ كلوريد الصوديوم على التوازن التناضحي لمرق الثيوكوليك واستخدام الجلوكوز في شكل لا مائي يمنع الرطوبة الزائدة في الوسط المجفف.

إعداد

مرق الثيوجليكولات مع مؤشر

تزن 29.75 غرام من المتوسط ​​المجفف وتذوب في 1 لتر من الماء المقطر. يتم ترك الخليط للوقوف لمدة 5 دقائق تقريبًا. قم بإحضار مصدر الحرارة وتهتز كثيرًا حتى يذوب تمامًا.

صب المتوسط ​​في أنابيب الاختبار والأوتوكلاف في 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة. السماح لتبرد قبل الاستخدام. تحقق من إدراج المنزل التجاري لحفظه. يوصي البعض بالحفاظ على درجة حرارة الغرفة في مكان مظلم ، والبعض الآخر في الثلاجة محمية من الضوء.

الرقم الهيدروجيني للوسط أعد هو 7.1 ± 0.2.

لون الوسط المجفف لونه بيج فاتح ومستعد عنبر خفيف مع بعض الإزهار.

مرق Thioglycollate مع مؤشر المخصب مع الهيمين وفيتامين K 1

هناك وسائل الإعلام التجارية التي تجلب بالفعل الهيمين وفيتامين K 1 ، وخاصة بالنسبة لزراعة اللاهوائية.

إذا لم يكن الوسيط المخصب لللاهوائيات متاحًا ، فيمكن تحضير مرق الثيوكوليكات الأساسي. تحقيقًا لهذه الغاية ، تتم إضافة 10 ملغ من هيدروكلوريد الهيمين و 1 ملغ من فيتامين K 1 لكل لتر من المتوسط. ومع ذلك ، إذا تمت إضافة الدم أو المصل إلى مرق thioglycollate ، فإن إضافة الهيمين أو فيتامين K ليست ضرورية.

مرق الثيوغليكولات مع كربونات الكالسيوم

إنه يأتي تجاريا ويتم إعداده باتباع تعليمات الإدراج.

مرق الثيوجليكولات بدون مؤشر

هذا له نفس تركيبة الثيوجليكولات الأساسية ، لكنه لا يحتوي على ريزازورين.

تزن 30 غرام من المتوسط ​​المجفف وتذوب في لتر واحد من الماء المقطر. ما تبقى من المستحضر هو نفسه كما هو موضح في مرق thioglycollate مع المؤشر.

استعمال

إن مرق الثيوغليكوليت مفيد لإثراء العينات السريرية ، خاصة تلك الموجودة في المواقع المعقمة. كما أنه مفيد للعينات غير السريرية ، مثل مستحضرات التجميل والأدوية ، إلخ.

لتلقيح العينات السائلة (مثل CSF ، السائل الزليلي ، وما إلى ذلك) ، يتم أولاً إخراج الطرد المركزي للعينات ثم أخذ قطرتين من الرواسب وتوضع في مرق الثيوكليكولات. احتضان عند 35 درجة مئوية لمدة 24 ساعة. إذا لم يكن هناك نمو في هذا الوقت (التعكر) ، احتضان يصل إلى 7 أيام كحد أقصى.

إذا تم أخذ العينة باستخدام المسحة ، يتم أولاً تلقيح وسائط الثقافة في ألواح وأخيراً يتم إدخال المسحة في المرق ، ويتم تقسيم الجزء البارز وتغطية الأنبوب ، وترك المسحة في الداخل. احتضان عند 35 درجة مئوية لمدة 24 ساعة ، 7 أيام كحد أقصى.

للعينات الصلبة ، تجانس في محلول ملحي الفسيولوجية (SSF) ثم تطعيم مرق thioglycollate مع 2 قطرات من التعليق.

في بعض الأحيان يمكن استخدامه كوسيلة نقل للعينات التي يشتبه بوجود وجود اللاهوائية الصارمة أو كحامل احتياطي لتخصيب اليورانيوم.

يستخدم نوع الثيوكليكولات مع كربونات الكالسيوم في صيانة سلالات التحكم لفترة أطول ، لأنه يتمتع بالقدرة على تحييد الأحماض الناتجة عن استخدام الجلوكوز ؛ هذه الأحماض سامة لبعض البكتيريا.

النمو في مرق الثيوكليكولات سوف يلاحظ من خلال تعكر الوسيط. يوصى بإجراء صبغة جرام وثقافتها في وسائط غير انتقائية وانتقائية ، اعتمادًا على نوع العينة والكائنات الحية الدقيقة التي يشتبه في أنها.

مراقبة الجودة

من أجل السيطرة على العقم ، يوصى باحتضان مرق واحد أو اثنين دون تلقيح. النتيجة المتوقعة هي مرق شفاف ، دون تغيير اللون ، على الرغم من أنه من الطبيعي أن نرى لونًا ورديًا طفيفًا على سطح الأنبوب.

من أجل مراقبة الجودة ، يجب تطعيم ما بين 10 - 100 CFU من سلالات التحكم المعتمدة ، مثل Staphylococcus aureus ATCC 6538 و Micrococcus luteus ATCC 9341 و Bacillus subtilis ATCC 6633 و Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 و Clostridium sporogenes ATCC 194037 و Clostridium sporogenes ATCC 19404 Bacteroides vulgatus ATCC 8482.

احتضان عند 30-35 درجة مئوية في aerobiosis لمدة 24 ساعة بحد أقصى 3 أيام ، لأن هذه الكائنات الحية تنمو بسرعة.

في جميع الحالات ، من المتوقع حدوث تطور جيد ، باستثناء Micrococcus luteus و Bacillus subtilis ، حيث قد يكون هناك تطور معتدل.

من أجل مراقبة جودة مرق الثيوكليكولات المخصب بالهيمين وفيتامين K 1 ، يمكن استخدام سلالات التحكم Bacteroides vulgatus ATCC 8482 و Clostridium perfringens ATCC 13124 و Bacteroides fragilis ATCC 25285. والنتيجة المتوقعة هي نمو مرض.

توصيات

- في مناسبات يمكن ملاحظة أن سطح مرق الثيوكليكولات مع مؤشر يتحول إلى اللون الوردي ؛ هذا بسبب أكسدة الوسط. إذا كان اللون الوردي يغطي 30٪ أو أكثر من مجموع المرق ، فيمكن تسخينه في حمام مائي لمدة 5 دقائق ، وتبريده مرة أخرى واستخدامه.

سيؤدي ذلك إلى إزالة الأكسجين الممتص ، مع إعادة الوسط إلى لونه الأصلي. لا يمكن تنفيذ هذا الإجراء إلا مرة واحدة.

-تحسين نمو البكتيريا الهوائية يجب تحضينها مع غطاء فضفاض قليلاً. ومع ذلك ، فمن الأفضل أن تستخدم لهذا الغرض مرق تسريب القلب من الدماغ أو مرق الصويا tripticase من أجل التطوير الصحيح للأيروبونات الصارمة.

- يجب تجنب تجميد الوسيط أو ارتفاع درجة الحرارة لأن كلا الشرطين يضران بالوسيط.

- يضر الضوء المباشر بالثقافة المتوسطة ، ويجب حمايته من الضوء.