BIGGY Agar: الأساس والتحضير والاستخدامات

BIGGY أجار هو ثقافة ثقافة صلبة وانتقائية وتفضيلية . تم تصميمه لعزل والمساعدة في تحديد أنواع المبيضات الرئيسية. يأتي اسمه BIGGY من الاختصارات في الإنجليزية Bismuth Glucose Glycine Yeast.

تم إنشاء الصيغة الأصلية من قبل Nickerson ، لذلك تُعرف هذه الوسيلة أيضًا باسم Nickerson agar. وهي تتألف حاليًا من خلاصة الخميرة ، الجلايسين ، الدكستروز ، سترات الأمونيوم ، سترات البزموت ، كبريتيت الصوديوم والأجار.

تم صياغة BIGGY agar للتمييز بين الأنواع Complex C. albicans و C.ropicalis و C. krusei و C. kefyr ، لكن الأنواع الأخرى تنمو أيضًا مثل Candida glabrata و C. parapsilosis و C. guilliermondii و Trichosporun sp و Geotrichum candidum و Saccharomyces cerevisiae.

لديها حساسية وخصوصية جيدة ، ومع ذلك ، عند مقارنتها بالوسائط الأخرى ذات وظيفة مماثلة ، فهذه هي الثانية ، التي يتم تجاوزها بواسطة CHROMagar. لهذا السبب تفضل العديد من المختبرات هذا الأخير ، على الرغم من أنه أكثر تكلفة بكثير.

يجب أن يكون واضحًا أن استخدام BIGGY agar ، بالإضافة إلى الوسائط المماثلة الأخرى ، يساعد في تحديد سريع ، ولكن لا يؤكد مطلقًا ، تحديدًا افتراضيًا. لذلك ، يجب توفير طرق تحديد إضافية ؛ على سبيل المثال ، أنظمة تعريف Vitek 32 و API 20.

مؤسسة

يُعد أجار BiGGY وسيطًا انتقائيًا جزئيًا لعزل الخمائر ، خاصة جنس المبيضات ، على الرغم من أن الأجناس الأخرى يمكن أن تنمو.

إنه أيضًا وسيط تفاضلي لأنه حسب الأنواع المعنية ، سيتم ملاحظة خصائص مختلفة من حيث المظهر واللون والشكل والحجم. يعتبر وسيط كرومي المنشأ ، بسبب تطور ألوان مختلفة في المستعمرات.

لون مستعمرات الخمائر يرجع إلى وجود كبريتيت البزموت في أجار. أدرك نيكرسون أن الخمائر من جنس المبيضات تؤدي انخفاضًا خارج الخلوي لكبريت البزموت ، وتحولها إلى كبريتيد البزموت (مادة غير قابلة للذوبان من اللون الأسود). هذا يسبب المستعمرات بين البني الفاتح إلى الأسود.

تحتوي هذه الآجار على خلاصة الخميرة وسكر العنب ، والتي توفر مصدر المواد الغذائية الأساسية والطاقة اللازمة لتطوير الخميرة. جليكاين منبه نمو الخميرة ، لأنه يمنع تطور بعض البكتيريا.

وبهذا المعنى ، تعمل سترات الأمونيوم والبزموت ، وكذلك كبريتيت الصوديوم ، كمثبطات للنمو البكتيري. أجار هو العامل الذي يعطي صلابة ثابتة للبيئة.

إعداد

تزن 45 غرام من وسط الثقافة المجففة وتذوب في لتر واحد من الماء المقطر. يُحرَّك المزيج وتسخينه ، ثم يغلي لمدة دقيقة حتى يذوب بالكامل. لا يتم تعقيم هذه الثقافة الثقافة في الأوتوكلاف.

عند التبريد إلى حوالي 45 درجة مئوية في حمام مائي ، صب 20 مل على أطباق بتري المعقمة.

لون الوسط المجفف رمادي مصفر وإعداده جل مصفر-أبيض ، حيث يمكن ملاحظة وجود رواسب خفيفة خفيفة.

يجب أن يكون الرقم الهيدروجيني عند 6.8 ± 0.2.

يجب تخزين الوسيط المعد في ثلاجة (4 درجات مئوية) ومحمي من الضوء. نظرًا لأنه وسيلة لا يتم تعقيمها ، يجب استخدامها في أسرع وقت ممكن. يوصى باستخدامه قبل 3 أيام من تحضيره.

استعمال

يتم تحضين الأطباق في درجة حرارة الغرفة (25 درجة مئوية) لمدة 24 و 48 و 72 ساعة ، ويمكن تمديد فترة الحضانة لمدة 5 أيام.

يطور كل نوع من أنواع المبيضات بعض الخصائص التي تجعلها تميز أحدها عن الآخر. يصف مصنعو الوسيط الخصائص التالية لكل نوع:

-المكملات المبيضات البيض: تتطور في هذا أجار مثل المستعمرات على نحو سلس ، مستديرة ، البني أو الأسود ، مع حدود mycelial طفيفة. باستثناء أن اللون الداكن لا ينتشر إلى الوسط.

-Candida الاستوائية: المستعمرات مشرق ، صغير ، بني داكن ، مع مركز أسود والحدود الخفيفة mycelial. ينتشر اللون الداكن في اتجاه الوسط ، وهو السمة المميزة لهذا النوع ، بعد حضنه لمدة 72 ساعة.

-Candida krusei تقوم بتطوير مستعمرات من الحجم الخشن المسطح والكبير ، مع الحدود بين البني والأسود.

-Candida parakrusei : مستعمرات متوسطة الحجم ، معظم الوقت ذات مظهر قاسي مسطح. يمكن أن يختلف اللون بين البني المحمر الفاتح إلى البني المحمر الفاتح. تقدم حدود المستعمرات أفطورة صفراء واسعة النطاق.

-Cellida stellatoidea : يطور مستعمرات متوسطة مسطحة ، بنية داكنة ، سوداء تقريبًا. تطوير mycelial نادر جدا.

أظهرت دراسة أجراها Yücesoy و Marol في عام 2003 ، أن وسط CHROMagar يقدم حساسية وخصوصية أفضل للتمايز وتحديد أنواع المبيضات المختلفة عن أجار BIGGY.

مراقبة الجودة

من أجل السيطرة على العقم ، يتم تحضين الصفائح غير الملقحة عند درجة حرارة 25 مئوية ، في الظلام لمدة 24 إلى 48 ساعة ، ومن المتوقع أنه لن يكون هناك أي نمو من أي نوع ، ولا تغيير اللون.

سلالات ATCC الموصى بها لمراقبة الجودة للوسط هي:

Candida albicans complex ATCC 60193 ، Candida glabrata ATCC 2001 ، Candida krusei ATCC 34135. ومن المتوقع نموها جميعًا كما هو موضح أعلاه.

يمكن أيضًا استخدام السلالات التالية:

Escherichia coli ATCC 25922 و Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 و Staphylococcus epidermidis ATCC 12228. في الأولين ، من المتوقع أن يحدث تثبيط كلي ، لكن في حالة النمو الجزئي ، ستكون المستعمرات ملونة بالكريمة.

في حالة المكورات العنقودية الذهبية المذهبة ، من المتوقع أن يتم تثبيتها تمامًا ، ولكن إذا نمت جزئيًا تكون مستعمراتها بيضاء.

القيود

بعض البكتيريا قادرة على التطور في هذه الوسيلة ويمكن أن تتحول إلى الظلام ، محاكية مستعمرة المبيضات ، ولكن عن طريق نشر المستعمرة ومراقبتها تحت المجهر يتم التخلص منها بسهولة.

جدول: خصائص مستعمرات بعض الخمائر في أجار بيجي وفقًا لأعمال Yücesoy M و Marol S.