XLD أجار: الأساس والتحضير والاستخدامات

XLD أجار أو Xylose ليسين Deoxycholate أجار هو وسيلة ثقافة صلبة انتقائية وتفضيلية لعزل مسببات الأمراض المعوية. صمم تايلور صيغة أجار XL (Xylose ، Lysine) من أجل تحسين عزل جنس Shigella.

ولاحظ أن هذا الجنس تم تثبيته في معظم وسائل الإعلام المخصصة لعزل الممرضات المعوية. بعد ذلك ، تمت إضافة deoxycholate الصوديوم وثيوكبريتات الصوديوم وسيترات الأمونيوم الحديديك لزيادة انتقائها. أثبتت هذه الصيغة أنها مفيدة لعزل الشيغيلة والسالمونيلا.

يتكون XLD agar من خلاصة الخميرة ، وإكسجين الصوديوم ، الزيلوز ، اللايسين ، اللاكتوز ، السكروز ، ثيوكبريتات الصوديوم ، سترات الأمونيوم الحديديك ، كلوريد الصوديوم ، الفينول الأحمر والأجار. في معظم مختبرات البكتريا ، يتم استخدام الثنائي XLD agar و SS agar لدراسة عينات البراز بحثًا عن Shigella و Salmonella.

تفضل المختبرات الأخرى الجمع بين CHROMagar Salmonella و XLD agar ، من بين الخيارات الأخرى المتاحة. يمكن تحضير هذه الثنائي في أطباق بيتري المزدوجة. على جانب واحد مكان أجار XLD وعلى الجانب الآخر المتوسط ​​المختار.

مؤسسة

الطاقة الغذائية

يحتوي XLD agar على خلاصة الخميرة ، والذي يعد مصدرًا للعناصر الغذائية للكائنات الحية الدقيقة التي تتطور في هذا agar. بالإضافة إلى ذلك ، فإن وجود الكربوهيدرات (الزيلوز والسكروز واللاكتوز) يوفر الطاقة للبكتيريا التي يمكن أن تخمرها.

-اختيار المتوسطة

كمادة مثبطة لديها deoxycholate الصوديوم. هذا يمنع نمو البكتيريا إيجابية الجرام ، وإعطاء الوسيطة شخصية انتقائية.

قوة مختلفة

المستعمرات النموذجية لشيجيلا

كما سبق ذكره ، XLD أجار يحتوي على الزيلوز. يتم تخمير هذا الكربوهيدرات بواسطة جميع البكتيريا التي تنمو في هذه الوسيلة باستثناء جنس Shigella.

هذه هي إحدى الخصائص التي تمنحها طابعها التفاضلي ، حيث يتم تمييز مستعمرات الشيغيلة عن البقية عن طريق تطوير مستعمرات حمراء ، في حين أن البكتيريا الأخرى تنتج مستعمرات صفراء.

المستعمرات النموذجية للسالمونيلا

جنس السالمونيلا يخمر أيضا الزيلوز ، يولد في البداية مستعمرات صفراء. ومع ذلك ، بعد استنفاد الكربوهيدرات الزيلوز ، فإنه يهاجم الليسين من خلال إنزيم ليسين ديكاربوكسيلاز. يقوم نزع الكربوكسيل من اللايسين بتكوين قلويات تتسبب في تغير لون المستعمرة والأوساط المحيطة باللون الأحمر.

يتم تنفيذ هذا السلوك فقط عن طريق السالمونيلا ، لأن القولونيات التي يزيل الكربوكسيل يسين تفشل في تهدئة الوسط. وذلك لأن القولونيات تخمر أيضًا اللاكتوز والسكروز. لذلك ، فإن إنتاج الأحماض مرتفع للغاية ، مما يترك المستعمرة الصفراء في هذه البكتيريا.

تجدر الإشارة إلى أن جنس السالمونيلا لا تخمر السكروز أو اللاكتوز.

إنتاج H 2 S

يسمح XLD agar أيضًا باكتشاف أنواع السالمونيلا التي تنتج H2S ؛ ولهذا السبب فإنه يحتوي على مصدر الكبريت الذي يمثله ثيوكبريتات الصوديوم ومطور التفاعل ، وهو سترات الأمونيوم الحديديك.

يتفاعل الأخير مع H 2S (غاز عديم اللون) ويشكل ترسبات سوداء مرئية غير قابلة للذوبان من كبريتات الحديد. بهذا المعنى ، ستكون خصائص مستعمرات السالمونيلا حمراء اللون بمركز أسود.

تجدر الإشارة إلى أنه لكي يحدث تفاعل تشكيل H2S ، يلزم وجود درجة حموضة قلوية. وهذا هو السبب في أن البكتيريا الأخرى التي تشكل H2S لا تستطيع أن تفعل ذلك أو تفعله بشكل سيء في هذه الوسيلة ، لأن الحموضة العالية التي تنتجها عند تخمير الكربوهيدرات الموجودة تمنع أو تعيق التفاعل.

- كلوريد الصوديوم ، أجار و الفينول الأحمر

أخيرًا ، يحتفظ كلوريد الصوديوم بالتوازن الأسموزي ؛ الأجار هو عامل التصلب ويكتشف أحمر الفينول تغيرات الرقم الهيدروجيني ، ويحول لون المستعمرات والوسط.

إعداد

يزن 55 جم من وسط XLD المجفف ويذوب في 1 لتر من الماء. سخني الخليط وحركه حتى يصل إلى درجة الغليان. لا تسخن ، لأن الحرارة تدمر الوسيط وتخلق راسب يغير شكل المستعمرات النموذجية.

هذه الوسيلة لا ينبغي أن الأوتوكلاف. عند الذوبان يجب تمريره إلى حمام مائي عند 50 درجة مئوية. عند التبريد ، يجب تقديمه مباشرة على أطباق بتري المعقمة. يمكن سكبها في لوحات بسيطة أو لوحات مزدوجة. يسمح لهم بالتصلب وتخزينه في الثلاجة حتى الاستخدام.

نخفف قبل الاستخدام. نظرًا لأنه وسيلة غير معقمة ، يوصى بإعدادها بالقرب من تاريخ استخدامها.

يجب أن يكون الرقم الهيدروجيني النهائي للوسط 7.4 ± 0.2. لون الوسط المحضر هو أحمر برتقالي ، شفاف ، دون ترسب.

إذا كان لديك أجار Xylose Lysine الأساسي (XL) ، فيمكنك إضافة deoxycholate الصوديوم وثيوكبريتات الصوديوم وسيترات الأمونيوم الحديدية. بهذه الطريقة يتم الحصول على صيغة أجار XLD.

تطبيقات

يستخدم XLD أجار لاستعادة الأمعاء ، وخاصة من جنس Shigella والثاني من جنس السالمونيلا. يفيد في تقييم عينات البراز والماء والغذاء.

أنواع العينات

تفل

يمكن وضع عينات البراز مباشرة على أجار XLD ، مما يؤدي إلى توزيع جيد للمواد للحصول على مستعمرات معزولة.

لتحسين تعافي السالمونيلا ، يمكن زرع أجار XLD من وسائط التخصيب في السالمونيلا.

طعام

في حالة الطعام ، يمكن استخدام مرق التخصيب للسالمونيلا والشيجيلا. بالنسبة إلى السالمونيلا ، يمكنك استخدام مرق السيلينايت ، مرق رباعيونيت أخضر ساطع ، من بين أشياء أخرى.

في حالة Shigella ، يمكن إثراءه مع مرق Shigella مع 0.5 ميكرولتر / مل من نوفوبيوسين ، المحتضنة عند 42 درجة مئوية 1 درجة مئوية لمدة 16-20 ساعة.

ماء

في تحليل المياه ، يوصى باستخدام تقنية الترشيح الغشائي واستخدام أجار XLD وغيرها.

شروط البذر وتحديد الهوية

يتم تحضينها في زرع المتوسطة في aerobiosis في 35 درجة مئوية لمدة 24 إلى 48 ساعة.

يتم ملاحظة المستعمرات النموذجية لكل جنس ، ويجب أن تخضع المستعمرات المشتبه فيها لاختبارات كيميائية حيوية للتعرف عليها.

مراقبة الجودة

لتقييم مراقبة الجودة في الوسط ، يمكن استخدام السلالات البكتيرية التالية: السالمونيلا التيفيموريوم ATCC 14028 ، السالمونيلا Enteritidis ATCC 13076 ، السالمونيلا أبوني DSM 4224 ، Shigella flexneri ATCC 12022 ، Shigella sonnei ATCC 25931 ، Escherichia coli ATCC 25922 ، Klebsiella pneumoniae ATCC 33495.

يتميز جنس السالمونيلا بوجود مستعمرات حمراء بها مراكز سوداء أو مستعمرات سوداء تمامًا. بينما ، في جنس Shigella ، يجب أن تكون المستعمرات حمراء ، أي لون الوسط.

في حالة الإشريكية القولونية ، من المتوقع أن يتم تثبيتها كليا أو جزئيا ؛ إذا نمت المستعمرات صفراء. من المتوقع أن تنمو Proteus mirabilis بشكل ضئيل مع المستعمرات الوردية مع أو بدون مركز أسود. أخيرًا ، سينمو جنس كلبسيلا كمستعمرات صفراء.

الاعتبارات النهائية

يستخدم XLD أجار على نطاق واسع في مختبرات علم البكتريا بسبب كفاءته العالية لاستعادة Shigella وأيضا لديه انتعاش جيد من جنس السالمونيلا.

أظهر رال وآخرون (2005) في عملهم المعنون "تقييم ثلاث مرق لتخصيب اليورانيوم وخمس وسائط صلبة للكشف عن السالمونيلا في الدواجن" أن من بين 3 وسائل إعلام كلاسيكية تم اختبارها (أجار أخضر ساطع وأجار SS وأجار XLD) ، XLD أجار حصلت على أفضل معدل الاسترداد.

وكانت نسب الانتعاش على النحو التالي: 13.8 ٪ لأجار أخضر ساطع ، 27.6 ٪ ل SS ، و 34.5 ٪ ل XLD. تم تجاوزه فقط من قبل وسائل الإعلام رامباخ آجار مع استرداد 48 ٪ وكروماجار مع 79.3 ٪.