مرق Malonato: الأساس ، إعداد واستخدامات

مرق المالت هو الوسيلة المزروعة السائلة المستخدمة للاختبار التشخيصي (اختبار المالتونو) ، وتستخدم لتمييز بعض الأجناس من عائلة Enterobacteriaceae. تم إنشاؤه من قبل ليفسون في عام 1933 وعدله إوينغ في وقت لاحق ، الذي أضاف كمية صغيرة من سكر العنب وخلاصة الخميرة إلى الصيغة الأصلية.

يتكون الوسط حاليًا من خلاصة الخميرة وكبريتات الأمونيوم وفوسفات ثنائي البوتاسيوم وفوسفات أحادي البوتاسيوم وكلوريد الصوديوم ومالونات الصوديوم والدكستروز والبروموثيمول الأزرق. عادة ما يتم تضمين هذا الاختبار في بطارية تحديد الهوية الكيميائية للبكتيريا المعوية ، مما يساعد على التمييز بين بعض الأجناس والأنواع.

يعتمد اختبار المالتون بشكل أساسي على قدرة بعض الكائنات الحية الدقيقة على استخدام مالت الصوديوم كمصدر للكربون الوحيد وكبريتات الأمونيوم كمصدر للنيتروجين.

عادة ما يكون اختبار malonate موجبًا في بعض أنواع الأجناس Enterobacter و Klebsiella و Citrobacter. في حين أن غالبية أنواع الأجناس Escherichia و Salmonella و Shigella و Edwardsiella و Yersinia و Serratia و Morganella و Proteus و Providence تعطي رد فعل سلبي.

مؤسسة

يتكون اختبار malonate من إظهار تلك البكتيريا القادرة على استخدام malonate الصوديوم كمصدر الكربون الوحيد وكبريتات الأمونيوم كمصدر للنيتروجين.

غالبية بكتيريا الأمعاء التي لا تستخدم المالتون قادرة على النمو في هذه الوسيلة ، مع تناول سكر العنب وخميرة الخميرة كمواد مغذية.

في هذه الحالة ، فإن أي محاولة للقلوية عن طريق استخدام الببتونات سيتم التصدي لها عن طريق إنتاج الأحماض الناتجة عن تخمير سكر العنب. وبالمثل ، فإن الديبوتاسيوم والفوسفات أحادي البوتاسيوم بمثابة عازلة للحفاظ على درجة الحموضة في 6.7.

لهذا السبب ، عندما يكون الاختبار سالبًا ، يكون المرق هو نفس اللون الأصلي (الأخضر). في حالات نادرة ، يمكن تحمض الوسط بسبب تخمير سكر العنب ؛ بدون استخدام peptones ومؤشر درجة الحموضة من شأنه أن يحول لون الوسط نحو الأصفر. لكي يحدث هذا ، يجب أن ينخفض ​​الرقم الهيدروجيني إلى 6.

الآن ، عندما يكون هذا الاختبار إيجابياً ، يقال إن الكائنات الحية الدقيقة تستخدم كبريتات الأمونيوم والأمونيوم كمصدر للكربون والنيتروجين على التوالي ، دون استخدام المكونات الأخرى.

في هذه الحالة ، يصبح الوسط قلويًا بسبب إطلاق الصوديوم وما يترتب عليه من تكوين هيدروكسيد الصوديوم. في هذا المعنى ، فإن مؤشر الرقم الهيدروجيني (الأزرق البروموثيمول) يحول اللون من الأخضر إلى الأزرق عندما يكون الرقم الهيدروجيني مساوياً أو أكبر من 7.6. قد يكون اللون الأزرق واضحًا أو شديدًا (اللون الأزرق البروسي).

أخيرًا ، يحافظ كلوريد الصوديوم على الأسمولية للوسط والماء هو المخفف لجميع المكونات.

ترجمة

مرق من نفس اللون (الأخضر): اختبار سلبي

مرق أصفر: اختبار سلبي

مرق أزرق فاتح أو مكثف: دليل إيجابي

هناك متغير يسمى مرق فينيل ألانين malonate ، وتسمى أيضًا شاو وكلارك المتوسطة. في هذه الحالة ، يمكن تحليل اختبارين ، استخدام المالونات كمصدر للكربون وإنتاج حمض البيروفيك من فينيل ألانين.

إعداد

مرق Malonato

يتم وزن مقدار الغرامات المحددة بواسطة إدراج المنزل التجاري المختار (يمكن أن يختلف من واحد إلى آخر). يتم تعليق غرام الثقيلة في لتر واحد من الماء المقطر. تسخينه قليلا حتى يذوب تماما. توزيع 3 مل من المتوسط ​​في أنابيب اختبار 13/100 مع غطاء من القطن.

تعقيمها في الأوتوكلاف في 121 درجة مئوية لمدة 15 أو 20 دقيقة.

بارد قبل الاستخدام. إذا لم يتم استخدامها على الفور ، خزنها في الثلاجة حتى الاستخدام. نخفف المرق في درجة حرارة الغرفة قبل تلقيحها.

يجب أن يكون الرقم الهيدروجيني للمتوسط ​​6.7 ± 0.2. لون المتوسطة المعدة الزجاجة الخضراء.

فينيل ألانين مالت المرق

يزن 11 جم من الوسط المجفف ويذوب في 1 لتر من الماء المقطر. ما تبقى من التحضير هو نفسه كما هو موضح أعلاه.

يمكن تحضيره أيضًا بإضافة 2 غرام / لتر من فينيل ألانين إلى وسط مرق المالتون قبل تعقيمه.

استعمال

يتم استخدامه كجزء من بطارية الاختبارات الكيميائية الحيوية التي يتم تجميعها لتحديد البكتيريا من عائلة Enterobacteriaceae.

ساعد في التمييز بين:

- جنس كليبسيلا و Enterobacter (+) من جنس Escherichia و Serratia (-).

- أنواع السالمونيلا enterica ssp arizonae ، Salmonella enterica ssp salame و Salmonella enterica ssp diarizonae (+) ، من الأنواع Salmonella enterica ssp enterica (-).

من جنس كليبسيلا عموما (+) من جنس Actinobacillus (-).

-يمكن أن تساعد في بعض الأحيان في التمييز بين الأجناس وأنواع البكتيريا التي لا تنتمي إلى عائلة Enterobacteriaceae ، مثل بين عصيات سلبية الغرام غير المخمّرة Alcaligenes faecalis (+) و Acinetobacter sp (-).

عملية

تحت أخف وزنا ، يتم أخذ جزء من مستعمرة نقية ، وذلك باستخدام مقبض البلاتين تعقيمها وتبريدها بشكل صحيح. تذوب العينة المأخوذة (اللقاح الخفيف) في مرق المالتون. يتم احتضانها مع غطاء فضفاض في aerobiosis عند 35 درجة مئوية ± 0.2 لمدة 24 إلى 48 ساعة.

يمكن أيضًا تلقيح مرق المالتون من ثقافة تمتد من 18 إلى 24 ساعة في مرق تريبتيكاز الصويا. في هذه الحالة ، يتم أخذ 0.01 مل مع ماصة معقمة ويتم تلقيح مرق المالتون. يتم احتضانها مع غطاء فضفاض في aerobiosis عند 35 درجة مئوية ± 0.2 لمدة 24 إلى 48 ساعة.

في نهاية الوقت يتم تفسير النتائج. أي آثار من اللون الأزرق تتوج بعد 48 ساعة من الحضانة يجب اعتبارها إيجابية. لا ينبغي أن يفسر الاختبار على أنه سلبي حتى يتم الانتهاء من وقت حضانة 48 ساعة.

في حالة استخدام مرق مالت فينيل ألانين البديل ، يتم تفسير المالتون أولاً ثم يتم إضافة 5 قطرات من 1N HCL و 3-5 قطرات من كلوريد الحديديك 8٪. يتم تفسير اللون الأخضر الداكن على أنه اختبار إيجابي للفينيل ألانين. من ناحية أخرى ، إذا تحول الوسط إلى اللون الأزرق الفاتح ، يكون الاختبار سالبًا بالنسبة للفينيل ألانين.

مراقبة الجودة

لأداء السيطرة على العقم من المتوسط ​​، يجب حضانة مرق واحد أو اثنين عند 35 درجة مئوية ± 0.2 لمدة 24 ساعة من الحضانة. في نهاية هذا الوقت يجب ألا يكون هناك تعكر ، لا تغيير في اللون.

لمراقبة الجودة ، يمكن استخدام سلالات معروفة أو معتمدة ، مثل: Enterobacter aerogenes ATCC 13048 و Klebsiella pneumoniae ATCC 33945 و Salmonella enterica ssp arizonae ATCC 13314 و Escherichia coli ATCC 25922.

النتائج المتوقعة هي:

  • تُعطي تفاعلات Enterobacter aerogenes و Klebsiella pneumoniae و Salmonella enterica ssp arizonae رد فعل إيجابي (لون أزرق متوسط).
  • بالنسبة إلى الإشريكية القولونية ، يجب أن تكون النتيجة سلبية ، أي أنه من المتوقع عدم حدوث تغيير في اللون (أخضر) أو أن يصبح لونه أصفر بسبب تخمير الجلوكوز.

القيود

لا تستخدم مرقًا يُظهر التعكر أو الترسبات أو تغيير اللون أو أي علامة تدهور.