إعداد وسائل الإعلام الثقافية: ما هي مكوناتها وأهدافها وخطواتها
يعد إعداد الوسائط الثقافية منهجية روتينية تستخدم في المختبرات لنمو الكائنات الحية الدقيقة المرغوبة. الوسائط المستنبتة هي محضرات صلبة أو سائلة أو شبه صلبة تمتلك جميع العناصر الغذائية اللازمة لتنمية مجموعة ميكروبية.
بشكل عام ، فإن وسائل نمو الكائنات الحية الدقيقة غنية بالبروتينات والأحماض الأمينية وعادة ما تحتوي على بعض المكونات التي تفضل نمو الكائن الحي الذي تريد دراسته ، مثل الفيتامينات والدم والمصل وغيرها.
لا يوجد أي ثقافة عامة أو عالمية ، حيث يختلف تكوينها وفقًا لاحتياجات الكائنات الحية الدقيقة ذات الاهتمام. يمكن أن تتطور بعض البكتيريا في أي وسيط ثقافي ، لكن لدى البعض الآخر متطلبات خاصة.
ماذا تتكون؟
الكائنات الحية الدقيقة ، مثل الفطريات والبكتيريا ، لا يمكن دراستها بشكل فردي بسبب حجمها الصغير. لذلك ، يجب أن تزرع في وسائل الإعلام الاصطناعية التي تسمح بزيادة كبيرة في عدد السكان.
على سبيل المثال ، إذا أردنا دراسة البكتيريا ، فعلينا أن نوفر لها الظروف المناسبة حتى يتسنى لها التكاثر وتكوين مستعمرة (يمكن ملاحظتها بالعين المجردة).
يختلف إعداد الوسائط الثقافية اعتمادًا كبيرًا على نوع الكائنات الحية الدقيقة التي يرغب الفرد في زراعتها. قبل إعداده ، من الضروري معرفة الاحتياجات الغذائية الأساسية لجسم العمل.
بعد ذلك ، سيتم وصف المكونات الأكثر شيوعًا المستخدمة في وسائط الثقافة لتكون لديها فكرة عامة عن تحضيرها:
أجار
يتم استخدامه في المحاصيل كعامل جل وتضاف عند البحث عن وسط صلب أو شبه صلب. كان الجيلاتين أول عامل تجمد يستخدم في إعداد الوسائط ، ولكن في عام 1883 تم إدخال أجار في عالم علم البكتريا بواسطة دبليو هيس.
أجار البكتريولوجي له مكونه الرئيسي وهو عديد السكاريد من الفروع المعقدة المستخرجة من الطحالب. يستخدم هذا المركب كمثخن للأطعمة الشائعة مثل الآيس كريم والمربيات.
إنه عنصر قيم للغاية في علم الأحياء المجهرية لعدة أسباب. يرجع السبب الرئيسي في ذلك إلى أن الكائنات الحية الدقيقة لا يمكن أن تتحلل ، تسيل عند درجة حرارة 100 درجة مئوية وتبقى في حالة سائلة حتى تصل إلى 45 درجة مئوية أو أقل.
في حال كنت ترغب في إعداد وسيط صلب ، يجب أن يكون تركيز أجار حوالي 1.5 ٪ ، في حين يجب أن تكون شبه الصلبة تستعد من 0.3 إلى 0.5 ٪.
السوائل
تتطلب زراعة الكائنات المسببة للأمراض سوائل جسدية بحيث يمكن أن تتطور كما هي في بيئتها الطبيعية. لهذا السبب ، يتم إضافة دم كامل أو مزيل الرجفان. يتم استخراج السائل من حيوان سليم ، وبعد تعقيمه ، يضاف إلى وسط الثقافة.
مقتطفات
يتم الحصول عليها من أجزاء حيوانية مختلفة (مثل اللحوم أو الكبد) أو الخضروات (البذور) ومعالجتها للحصول على تركيز صلب في شكل عجينة أو مسحوق. الأكثر شيوعا هي الخميرة والشعير واللحوم.
Peptonas
يتم الحصول على هذه المركبات العضوية عن طريق التحلل الأنزيمي أو الكيميائي للأنسجة الحيوانية أو النباتية. والغرض من ذلك هو إضافة محتوى غني بالأحماض الأمينية ، وهي الوحدات الأساسية للبروتينات.
امتصاص الصدمات
تتجنب المخازن المؤقتة أو الأنظمة المؤقتة حدوث تغييرات مفاجئة في الرقم الهيدروجيني وتساعد في الحفاظ على النطاق الأمثل الذي يتحمله الجسم.
يمكن أن تتطور معظم الكائنات بشكل صحيح عند درجة الحموضة 7 ، على الرغم من أن بعض البكتيريا تفضل الوسائط القلوية. ومع ذلك ، هناك البكتيريا التي تقاوم الاختلافات درجة الحموضة بين قيم 6 و 9.
في الأنواع الحساسة للحموضة ، لا ينتج الضرر عن الكمية المفرطة من أيونات الهيدروجين أو الهيدروكسيل ، ولكن عن طريق الزيادة في الأحماض أو القواعد الضعيفة التي يمكن أن تخترق الخلية.
وبالمثل ، يتم إضافة مؤشرات الرقم الهيدروجيني لرصده وتجنب الانحرافات الناجمة عن التخمير أو غيرها من العمليات.
أهداف
الهدف الرئيسي عند إعداد وسيط للثقافة هو إضافة جميع المكونات الضرورية للسماح بالتطور الناجح للكائن الحي الذي يرغب في عزله. يجب تحديد المزيج الأكثر فاعلية من المكونات والمواد الغذائية لتحقيق الوسيلة المرغوبة.
يعد إعداد وتخزين الوسيلة أمرًا ضروريًا لضمان نمو ناجح ، حيث تعتمد هذه الخطوات على تكوين البيئة وتوافر المواد الغذائية.
يجب أن يؤخذ في الاعتبار أن زراعة الكائنات الحية الدقيقة هي مهمة تتأثر بعدة عوامل خارجة عن وسط الثقافة ، مثل شدة الضوء المستلم ودرجة الحرارة ومستوى حموضة أو قلوية الوسط. لذلك ، يجب أن تؤخذ كل من هذه المتغيرات في الاعتبار.
أنواع الوسائط
بناء على تكوينها
بناءً على تركيبته ، هناك ثلاثة أنواع رئيسية من المحاصيل: الوسائل الطبيعية أو التجريبية ، أو شبه الاصطناعية أو الكيميائية أو الكيميائية المحددة.
البيئة الطبيعية
في البيئات الطبيعية التكوين الدقيق غير معروف. وتشمل هذه المكونات مثل الحليب ، والدم المخفف ، وعصائر الخضروات ، ومقتطفات ، ودفعات من اللحوم والبيبتوناس. لأسباب اقتصادية ، غالبًا ما تتم إضافة مكونات منخفضة التكلفة مثل مستخلص الصويا والمصل والمولاس وغيرها.
الوسائط شبه الاصطناعية
ويسمى الوسيط شبه الاصطناعية إذا كان تكوينه معروفًا جزئيًا. أي وسيط يحتوي على أجار يصبح وسيط شبه اصطناعي.
من بينها لدينا بابا سكر العنب أجار ، أجار تشابك دوكس ، أجار الشوفان ، أجار لحوم بيبتون ، من بين أمثلة أخرى.
الاصطناعية أو الكيميائية المحددة المتوسطة
في هذه الحالة ، فإن تكوين الوسط - من حيث كمية الكربون والنيتروجين والكبريت والفوسفور وأي مصادر عوامل نمو أخرى - معروف تمامًا. إنه مفيد للغاية إذا كنت ترغب في الحصول على نتائج قابلة للتكرار للباحثين الآخرين.
بالنسبة لما يسمى "الكائنات الدقيقة ذات متطلبات النمو الخاصة" ، من الضروري إضافة المكونات الضرورية. مثال على هذا النوع هي Lactobacillus .
بناء على نوع من الكائنات الحية الدقيقة
وبالمثل ، هناك تصنيف آخر لوسائط الثقافة يعتمد على نوع الكائنات الحية الدقيقة التي يمكن أن تنمو فيه. باتباع هذا المبدأ ، لدينا الوسائل العامة التالية للتخصيب والانتقائية والتفاضلية. كل واحد موصوف أدناه:
الوسائل العامة
هذه الاعتراف تطور مجموعة واسعة من الكائنات الحية الدقيقة. إذا كان أي كائن حي يحتاج إلى شروط خاصة لنموه ، فلن يكون قادرًا على التطور بنجاح في هذا النوع من المحاصيل.
التخصيب يعني
تفضل وسائل الإثراء نمو نوع معين من الكائنات الحية الدقيقة ، ولكن لم تتم إضافة أي مادة لمنع الأنواع الأخرى من الميكروبات من النمو فيه.
وسائط انتقائية
إنهم يبحثون عن النمو المحدد للكائنات الحية الدقيقة ، ويسمونها الفطريات والبكتيريا والبروتوزوا وغيرها. لهذا ، فإنها تمنع تطور الآخرين.
ولتحقيق هذا الهدف ، يمكن إضافة مركبات كيميائية قاتلة لمجموعة كبيرة من الكائنات الحية الدقيقة وغير ضارة بالكائن محل الاهتمام أو إضافة مصادر طاقة يتم استيعابها فقط بواسطة الميكروب المطلوب.
يتم استخدام الوسائط الانتقائية عند أخذ العينات الطبية من أجل تنمية الكائنات الحية الدقيقة المسببة للأمراض. هنا من الضروري تفضيل نمو العامل الممرض ومنع نمو النباتات الميكروبية الطبيعية من المريض.
على سبيل المثال ، لا يسمح بسموت أجار الكبريت بنمو البكتيريا إيجابية الجرام وعدد كبير من البكتيريا الموجودة في تجويف الجهاز الهضمي. لذلك ، يتم استخدامه لزراعة البكتيريا سالبة الجرام التي تسبب حمى التيفوئيد ، السالمونيلا التيفية في عينات البراز.
الوسائط التفاضلية
يستخدم هذا النوع بعض الخصائص التشخيصية للكائن ذي الأهمية (الخصائص في عملية التمثيل الغذائي ، على سبيل المثال) لتكون قادرًا على التعرف عليها ضد الأنواع الأخرى التي تنمو في الوسط نفسه.
تعد الوسائط التفاضلية والوسائط الانتقائية مفيدة جدًا في مجال علم الأحياء المجهرية السريرية والصحة العامة ، نظرًا لأن هذه التخصصات تحتاج إلى الكشف عن وجود كائنات دقيقة محددة تتعلق بظروف أو ظروف النظافة الصحية السيئة.
يمكن إضافة مواد المؤشر إلى المحصول الذي يعطي خاصية مميزة للمستعمرة المطلوبة. على سبيل المثال ، يضاف اللاكتوز ومؤشر الرقم الهيدروجيني إلى الأزرق أجار إيوسين الميثيلين (اختصار EMB) وأغار ماكونكي.
وبالتالي ، عندما يتم تطوير مستعمرة في هذه الوسائط مع القدرة على تخمير اللاكتوز وإنتاج الألدهيدات ، يمكن ملاحظتها بلون خاص.
خطوات
حاليا يمكن شراء وسائل الإعلام الثقافة في شكل مجفف بالتجميد. لذلك ، يتم إعداد المستحضر ويتم ترطيب المنتج فقط. يجب وزن المحتوى (مع مراعاة الكمية النهائية المراد تحضيرها) وتذويبها في الماء المقطر بعد جميع مؤشرات المنتج.
يجب تقسيم محتوى الوسائط السائلة إلى أوعية مرغوبة (أطباق بتري ، أنابيب ، إلخ) للتعقيم اللاحق. لتوزيع الوسيط الصلب من الضروري صهره باستخدام ميكروويف أو عن طريق تعريض المادة إلى حمام مائي. يجب ضبط درجة الحموضة المتوسطة.
عادة ما يتم استخدام أجار في أنابيب الاختبار أو في أطباق بتري. إذا تجمد أجار في وضع مائل ، مع الزاوية المناسبة بحيث تكون الحافة الطرفية النهائية قطريًا ، يُعرف هذا الترتيب باسم ذروة الفلوت أو الأنابيب المائلة. عندما يصلب أجار في وضع عمودي بالكامل يطلق عليه "عميق".
بعد تعقيم الوسائط - باستخدام الأوتوكلاف - يُسمح لها بالتبريد. يجب التعامل مع هذه في بيئة خالية من الكائنات الحية الدقيقة ، والأكثر شيوعا هو العمل مع أخف وزنا الإضاءة التي تضمن بيئة معقمة في المنطقة المجاورة لها.
